Lambda Protein Phosphatase (重組λ蛋白磷酸酶)，即λ Protein Phosphatase，是一種錳離子(Mn2+)依賴的重組表達(dá)純化的磷酸蛋白酶，可以對磷酸化的絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸和組氨酸殘基進(jìn)行脫磷酸反應(yīng)。
本產(chǎn)品是大腸桿菌重組表達(dá)的帶6×His標(biāo)簽的重組λ磷酸酶。該磷酸酶由λ噬菌體開放閱讀框ORF221所編碼，編碼產(chǎn)物共包含221個氨基酸殘基。
Lambda Protein Phosphatase可以用于蛋白的去磷酸化，從而可以用于研究蛋白磷酸化與其活性和結(jié)構(gòu)的關(guān)系，以及驗(yàn)證蛋白磷酸化位點(diǎn)抗體的特異性等。
酶活性單位定義：在30℃ pH7.5條件下反應(yīng)1分鐘，能夠水解1nmol p-nitrophenyl phosphate所需的酶量定義為一個活性單位。
Lambda Protein Phosphatase酶活性鑒定結(jié)果參考圖1。
圖1. Lambda Protein Phosphatase酶活測定實(shí)驗(yàn)圖。左圖：pNP標(biāo)準(zhǔn)曲線。右圖：Lambda Protein Phosphatase按照30、40、50、80、100、200、500倍稀釋后，在50µl反應(yīng)體系中的酶量分別為0.27µg、0.20µg、0.16µg、0.10µg、0.08µg、0.04µg、0.016µg，并與100mM pNPP在1×Lambda Protein Phosphatase Buffer和1×MnCl2中在30℃反應(yīng)5min后，加入12.5µl 3M NaOH終止反應(yīng)，測定產(chǎn)生的pNP在405nm吸光度，并根據(jù)pNP標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算Lambda Protein Phosphatase酶活性。不同批次檢測出來的酶活性會略有差別。
酶分子量大�。杭s26kDa。
純度：純度大于95%。
Lambda Protein Phosphatase存儲液組成為：50mM This-HCl (pH7.5)，100mM NaCl，0.1mM MnCl2，0.1mM EGTA，2mM dithiothreitol (DTT)，0.01%Brij35，50%(v/v)甘油。
10× Lambda Protein Phosphatase Buffer組成為：500mM Hepes (pH7.5)，100mM NaCl，20mM DTT，0.1% Brij35。
10× MnCl2組成為：10mM MnCl2。
失活：在50mM EDTA存在的條件下，65℃加熱1小時可使Lambda Protein Phosphatase失活。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| P2316S-1 | Lambda Protein Phosphatase (70U/µl) | 300µl |
| P2316S-2 | 10× Lambda Protein Phosphatase Buffer | 1ml |
| P2316S-3 | 10× MnCl2 (10mM MnCl2) | 1ml |
| — | 說明書 | 1份 |
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| P2316M-1 | Lambda Protein Phosphatase (70U/µl) | 1.5ml |
| P2316M-2 | 10× Lambda Protein Phosphatase Buffer | 5ml |
| P2316M-3 | 10× MnCl2 (10mM MnCl2) | 5ml |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存，一年有效。如果希望保存更長時間，可以適當(dāng)分裝后-80℃凍存。
注意事項(xiàng)：
反復(fù)凍融會導(dǎo)致Lambda Protein Phosphatase酶活性降低。如果希望在-80℃凍存，建議適當(dāng)分裝后保存，以方便后續(xù)使用。在-20℃存放時不會結(jié)凍，但在-80℃凍存時會結(jié)凍。
10mM釩離子(vanadate ions)能抑制Lambda Protein Phosphatase活性約90%，50mM EDTA可以抑制Lambda Protein Phosphatase活性約95%，1% Triton X-100、0.4% Nonidet P-40、0.025% Tween 20、0.5M NaCl、0.1mM ATP、10μg/ml pepstatin A、10μg/ml leupeptin, 10μg/ml aprotinin, 0.5mM PMSF、1mM benzamidine不影響Lambda Protein Phosphatase的酶活性。
需要注意的是不同蛋白脫磷酸化反應(yīng)的速率是不同的，該酶的最佳反應(yīng)溫度是30℃。某些樣品的粗提液用該酶進(jìn)行去磷酸化處理時，請注意用盡可能短的時間進(jìn)行處理，同時添加適量蛋白酶抑制劑(P1005、P1010、ST505或ST506等)以減少目的蛋白的降解。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1.Lambda Protein Phosphatase對不同蛋白的脫磷酸化反應(yīng)有不同活性，所以在實(shí)際應(yīng)用中，我們建議對酶濃度和反應(yīng)時間進(jìn)行優(yōu)化。反應(yīng)體系中，反應(yīng)緩沖液為1× Lambda Protein Phosphatase Buffer并且同時加入1× MnCl2 (最終濃度為1mM)。
2.以一般的去磷酸化反應(yīng)為例：在50μl反應(yīng)體系中，100U的Lambda Protein Phosphatase在30分鐘內(nèi)可以除去相當(dāng)于5μM的磷酸化的蛋白(單磷酸化)中約100%的磷酸。
