PCR純化試劑盒(PCR Clean Up Kit)，也稱DNA純化試劑盒(DNA Purification Kit)是一種用于PCR產(chǎn)物純化或從多種DNA反應(yīng)體系中純化DNA的試劑盒。
適用于PCR反應(yīng)后去除引物、酶、礦物油、甘油、鹽等雜質(zhì)；也同樣適用于酶切、連接、磷酸化、補(bǔ)平或切平、隨機(jī)引物等反應(yīng)后的DNA純化。純化所得DNA可直接用于酶切、連接、轉(zhuǎn)化細(xì)菌、測序、PCR、雜交等后續(xù)操作。本試劑盒適用于純化100bp-10kb DNA，長至30個(gè)堿基的引物均可被完全去除。
本試劑盒采用了一種新型的DNA純化柱。在特定條件下，使DNA能在離心過柱的瞬間，結(jié)合到DNA純化柱上，在一定條件下又能將DNA充分洗脫，從而實(shí)現(xiàn)DNA的快速純化。無需酚氯仿抽提，無需酒精沉淀，12個(gè)樣品只需不足15分鐘即可完成。
每個(gè)DNA純化柱可以結(jié)合的DNA量的上限約為15微克。
DNA回收效率約為90%。接近100bp或10kb的DNA片段回收效率要略低一些，大于10kb的DNA回收效率迅速下降。另外如果樣品中DNA含量特別低也會(huì)導(dǎo)致回收效率下降。本試劑盒的純化效果參見圖1。
圖1. 本試劑盒純化效果圖。本圖僅作參考，不同的樣品不同的純化條件，實(shí)際的純化效果可能和上圖有一定的差別。
本試劑盒足夠純化50個(gè)平均體積不超過400微升的DNA樣品。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| D0033-1 | 溶液I (DNA純化結(jié)合液) | 20ml |
| D0033-2 | 溶液II (洗滌液) | 26ml (第一次使用前加入39ml無水乙醇) |
| D0033-3 | 溶液III (洗脫液) | 3ml |
| D0033-4 | DNA純化柱及廢液收集管 | 50套 |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
室溫保存，一年有效。
注意事項(xiàng)：
第一次使用前在溶液II(洗滌液)中加入39ml無水乙醇，混勻，并在瓶上做好標(biāo)記。
溶液I對人體有刺激性，操作時(shí)請小心，并注意適當(dāng)防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
本試劑盒所有操作均在室溫進(jìn)行，操作時(shí)無需冰浴。所有離心也均在室溫進(jìn)行。
廢液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丟棄。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 加入等體積的溶液I，混勻。
例如DNA樣品體積為100微升，則加100微升溶液I。如果等體積混合后體積較大，可以把部分樣品加入到純化柱內(nèi)，經(jīng)離心處理后，再加入剩余的樣品繼續(xù)處理。礦物油對于本試劑盒沒有干擾。
2. 把與溶液I等體積混勻的樣品加入到DNA純化柱內(nèi)，室溫放置1分鐘。通常室溫放置數(shù)秒待溶液浸潤到純化柱中即可。
3. 最高速(16,000g，約12,000-14,000rmp左右)離心1分鐘，倒棄收集管內(nèi)的液體。
注意：這一步盡量要達(dá)到16,000g，較低離心速度會(huì)導(dǎo)致回收效率下降。
4. 在DNA純化柱內(nèi)加入700微升溶液II，室溫放置1分鐘。
5. 最高速離心1分鐘，洗去雜質(zhì)。倒棄收集管內(nèi)的液體。
6. 再加入500微升溶液II，最高速離心1分鐘，進(jìn)一步洗去雜質(zhì)。倒棄收集管內(nèi)的液體。
7. 最高速再離心1分鐘，除去殘留液體并讓殘留的乙醇充分揮發(fā)。
8. 將DNA純化柱置于1.5毫升離心管上，加入50微升溶液III至管內(nèi)柱面上，放置1分鐘。
用1.5ml離心管作為收集管。溶液III需要直接加至管內(nèi)柱面中央，使液體被純化柱吸收。如果不慎將溶液III沾在管壁上，一定要震動(dòng)管子，使液體滑落到管底，以便被純化柱吸收。也可以用重蒸水或Milli-Q級純水替代溶液III，但是水的pH值應(yīng)不小于6.5。如需得到較高濃度的DNA，可以只加20-30微升溶液III，但產(chǎn)量會(huì)略有下降。放置較長時(shí)間例如3-5分鐘，會(huì)對提高產(chǎn)量略有幫助。
9. 最高速離心1分鐘，所得液體即為高純度DNA。
