產(chǎn)品及特點
本產(chǎn)品專門用于快速去除石蠟包埋組織切片中的石蠟,用于提取DNA前的預(yù)處理。本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 快速,只需要離心一次,免去了反復(fù)換液和離心的麻煩。
2. 操作步驟少,不容易丟失產(chǎn)品樣品。
3. 去蠟效果跟經(jīng)典的二甲苯/乙醇法相當(dāng)。
4. 即開即用,客戶自己不需要準備額外的試劑。
使用及效果
將1 mL溶液A加入到含有一片組織切片的1.5 mL塑料離心管中,振蕩10秒,加入75 μL溶液B,振蕩10秒混合,7000 g離心兩分鐘,小心吸棄上清,真空抽干殘留液體,得到的石蠟包埋組織切片即可用于DNA提取。
備忘錄
制作石蠟包埋切片步驟
制作石蠟切片,切片前須將石蠟滲透組織包埋于石蠟中,常規(guī)的石蠟包埋過程包括五個基本步驟,即固定,脫水,透明,浸蠟和包埋。
固定:固定是指將得到的各種新鮮組織迅速浸入防腐劑內(nèi),使細胞內(nèi)的物質(zhì)為不溶性。固定的作用即是用一種方法將組織盡可能保持在它原來的形態(tài),且能適于某些研究程序。在制作切片過程中,固定最為重要的步驟。固定不良在以后制片的任何階段皆不能補救。因此制片的優(yōu)劣首先取決于最初固定適當(dāng)與否。固定通過下面三種方式達到此目的:1、抑制組織細胞自溶和腐敗;2、沉淀或凝固組織內(nèi)的各種成份和病理代謝產(chǎn)物,如蛋白質(zhì),脂及脂蛋白、脂肪、糖類、色素,其它碳水化合物,無機成份,微生物等,使之能長期保存并在制片過程中不為其他試劑溶解破壞;3、硬化:固定劑的硬化作用能使柔軟組織(如腦)的質(zhì)地變硬而易于操作。固定液分為簡單固定液和混合固定液。常見的有10%中性甲醛、4%多聚甲醛最合適, 70%乙醇等。
脫水:由于水與石蠟不相溶,而上步使用的固定劑多是水溶液,所以在浸蠟包埋前必須將組織內(nèi)所含的水分脫去。常用的脫水劑酒精、丙酮(Acetone)、正丁醇(γ-Buty alcohol) 和二氧乙環(huán)(Dioxan)。
透明:由于酒精和石蠟不能混合,須再用一種石蠟的溶劑來置換酒精,因大多數(shù)石蠟溶劑有使組織的折光率增高(近于組織蛋白的折射系數(shù))并表現(xiàn)為透明或半透明狀,所以此步驟又稱透明,盡管透明僅是一種過程而非目的。組織一旦呈現(xiàn)透明狀態(tài),也說明脫水劑已被媒劑所取代。常用的透明劑有二甲苯,苯,甲苯,氯仿,香柏油等。
浸蠟:組織經(jīng)媒劑的透明作用之后,移入熔化的石蠟內(nèi)浸漬,石蠟逐漸浸入組織間隙,取代透明劑,這一程序就叫浸蠟。根據(jù)所用石蠟的熔點,浸蠟需要能夠保持于54-60℃溫箱內(nèi)進行。石蠟的質(zhì)量和熔度與切片質(zhì)量密切相關(guān),因此對石蠟的選擇應(yīng)以注意。為了增加石蠟的韌性,可在石蠟中加入一些混合劑,常用蜂蠟,硬脂酸,松香等。
包埋,就是將已經(jīng)經(jīng)過固定,脫水,透明,浸蠟的組織塊從最后的蠟浴取出置入充滿熔融石蠟的包埋框內(nèi),包埋成塊,使組織和包埋劑相熔一體并迅速冷卻,這個程序稱為包埋。包埋劑凝固后,進一步加強了組織的硬度和韌度而便于進行切片。
石蠟包埋法是制作光學(xué)顯微鏡切片的常規(guī)方法,它有許多優(yōu)點,操作簡易便于掌握,可進行連續(xù)切片,包埋后的組織可以長期保存。包埋的方法有自動包埋機包埋和手工包埋兩種。