生物素檢測(cè)封閉試劑盒(Biotin Assay Blocking Kit)，是一種主要用于SABC (Streptavidin-Biotin Complex)法或ABC (Avidin-Biotin Complex)法等基于生物素和鏈霉親和素(Streptavidin)或親和素(Avidin)進(jìn)行免疫組化(Immunohistochemistry, IHC)、免疫細(xì)胞化學(xué)(Immunocytochemistry, ICC)、免疫熒光(immunofluorescence, IF)、原位核酸雜交等檢測(cè)過(guò)程中，對(duì)組織及細(xì)胞樣品進(jìn)行封閉以顯著降低背景的試劑盒。
基于生物素的檢測(cè)技術(shù)，例如SABC法、ABC法等可以顯著提高檢測(cè)靈敏度，是常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)。但有時(shí)會(huì)受內(nèi)源性的生物素和生物素結(jié)合蛋白等的影響而產(chǎn)生一定的背景。
本試劑盒不僅可以封閉內(nèi)源性的生物素和生物素結(jié)合蛋白，也能封閉樣本對(duì)于streptavidin或avidin的非特異性結(jié)合。
按照本試劑盒推薦的條件，生物素檢測(cè)相關(guān)的封閉可以和常規(guī)的免疫染色封閉同時(shí)進(jìn)行，顯著節(jié)約封閉時(shí)間。
一些細(xì)胞和組織，如腎臟、肝臟和脾臟等含有一定量的內(nèi)源性生物素或者生物素結(jié)合蛋白，利用SABC法或ABC法等進(jìn)行IHC、ICC、IF和原位雜交等實(shí)驗(yàn)時(shí)，它們會(huì)結(jié)合streptavidin或avidin、生物素標(biāo)記的辣根過(guò)氧化物酶(biotinylated horseradish peroxidase)或生物素標(biāo)記的堿性磷酸酶(biotinylated alkaline phosphatase)等而產(chǎn)生較高的非特異性染色背景，從而產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。此外，樣本和streptavidin或avdin可能存在的非特異性結(jié)合也會(huì)導(dǎo)致一定的背景染色。因此，使用生物素檢測(cè)封閉液對(duì)細(xì)胞和組織進(jìn)行封閉預(yù)處理是非常必要的，使用本試劑盒可以有效減少非特異性染色，提高檢測(cè)靈敏度。
本試劑盒含兩種封閉液，Biotin Blocking Buffer (100X)中含有streptavidin等，可以充分結(jié)合并封閉內(nèi)源性的生物素，并可以減少后續(xù)對(duì)于標(biāo)記的streptavidin的非特異性結(jié)合；Streptavidin/Biotin-Binding Blocking Buffer (100X)中含有生物素，可以充分封閉內(nèi)源性生物素結(jié)合蛋白以及前一步封閉時(shí)結(jié)合的streptavidin。通過(guò)兩步法的封閉，可以達(dá)到顯著降低背景的目的。
本試劑盒適用于冰凍切片和石蠟切片的封閉，也適用于培養(yǎng)細(xì)胞的封閉。
按照每封閉一個(gè)樣品需要兩種封閉液各100μl計(jì)算，一個(gè)包裝的本試劑盒可以封閉200個(gè)樣品。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| P0101-1 | Biotin Blocking Buffer (100X) | 200μl |
| P0101-2 | Streptavidin/Biotin-Binding Blocking Buffer (100X) | 200μl |
| — | 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
使用本試劑盒推薦的條件進(jìn)行封閉后，無(wú)需再進(jìn)行常規(guī)的免疫染色封閉操作步驟。推薦條件下，本試劑盒能同時(shí)進(jìn)行生物素相關(guān)的封閉和常規(guī)封閉。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說(shuō)明：
1. 對(duì)于組織切片或細(xì)胞樣品或膜，在與堿性磷酸酯酶標(biāo)記的抗體或其它形式的探針?lè)跤�，用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。對(duì)于檢測(cè)內(nèi)源性堿性磷酸酯酶的組織或細(xì)胞樣品，在適當(dāng)固定后，也用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。
2. 按照如下比例依次加入各溶液，混勻后即配制成BCIP/NBT染色工作液：
| 堿性磷酸酯酶顯色緩沖液 | 3ml | 10ml |
| BCIP溶液(300X) | 10μl | 33μl |
| NBT溶液(150X) | 20μl | 66μl |
| BCIP/NBT染色工作液 | 3.03ml | 10.1ml |
3. 最后一次洗滌完畢后，去除洗滌液，加入適量BCIP/NBT染色工作液，確保能充分覆蓋樣品。
4. 室溫避光孵育5-30分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間(可長(zhǎng)達(dá)24小時(shí))，直至顯色至預(yù)期深淺。
5. 去除BCIP/NBT染色工作液，用蒸餾水洗滌1-2次即可終止顯色反應(yīng)。
6. 對(duì)于組織切片或細(xì)胞樣品，顯色反應(yīng)終止后，如有必要可以用中性紅染色液(neutral red staining solution)染色，以便于觀察。對(duì)于膜，顯色反應(yīng)終止后，可以室溫晾干避光保存
