基于PCR的中藥分子鑒定方法是辨別中藥真?zhèn),保證藥材質(zhì)量,促進(jìn)中藥產(chǎn)業(yè)現(xiàn)代化的十分重要的手段。但由于日曬,高溫烘烤等處理極大地破壞了中藥材DNA 的完整性;處理過(guò)程中多酚多糖及其氧化物也會(huì)與DNA發(fā)生復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng),所以從中藥材中提取可以用于PCR的DNA比從新鮮植物中提取要困難很多。為解決這一問(wèn)題,在植物DNAOUT產(chǎn)品基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。其特點(diǎn)如下:
1. 適合于大多數(shù)藥材。
2. 得到的DNA純凈,OD260/280一般都在1.6以上,原液或100倍之內(nèi)的稀釋液 一般都能直接作為PCR模板。
3. 操作簡(jiǎn)單,整個(gè)過(guò)程只需要三十分鐘左右。
試劑無(wú)毒無(wú)害,環(huán)保衛(wèi)生
稱取20 mg左右中藥材,剪碎或研磨碎,加入0.75 mL 預(yù)熱溶的溶液A,勻漿,65℃水浴5 分鐘,加入等體積溶液B,振蕩30秒混勻,冰浴5分鐘,室溫離心5分鐘,上清中加入0.2 mL氯仿,振蕩后室溫離心3分鐘,重復(fù)氯仿抽提一次,上清中加入1倍體積異丙醇,室溫離心5分鐘,棄上清,用75%乙醇洗沉淀兩次即得DNA
圖注:用本產(chǎn)品提取的中草藥DNA 溶液的原液作為模板進(jìn)行植物專一性PCR擴(kuò)增,模板體積占PCR 體系(50 μL)的1/10。1-4分別表示黨參、柴胡、桔梗、車前子DNA樣品。電泳上樣量為20 μL),PCR片段長(zhǎng)約500 bp左右,M為DL 2000
麻黃 | Caulis Ephedrae | 1.68 | 原液 |
肉桂 | Cortex Cinnamomi | 1.73 | 原液 |
當(dāng)歸 | Radix Angelica | 1.69 | 1/100稀釋液 |
天冬 | Radix Asparagi | 1.50 | 原液 |
柴胡 | Radix Bupleuri | 1.60 | 原液 |
菊花 | Flos Chrysanthemi. | 1.78 | 1/10稀釋液 |
黨參 | Radix Codonopsis | 1.72 | 原液 |
甘草 | Radix Glycyrrhizae | 1.80 | 原液 |
板藍(lán)根 | Radix Isatidis | 1.68 | 原液 |
車前子 | Semen Plantaginis | 1.60 | 原液 |
桔梗 | Radix Platycodi | 1.68 | 原液 |