線(xiàn)粒體DNA（mtDNA）是進(jìn)行分子進(jìn)化研究和母性遺傳研究的重要材料，但傳統(tǒng)的兩步式mtDNA提取方法是先溫和裂解細(xì)胞，分離線(xiàn)粒體，然后再?gòu)木�(xiàn)粒體中提取mtDNA。此方法中的溫和裂解細(xì)胞的條件十分難以控制，需要針對(duì)不同組織材料單獨(dú)進(jìn)行優(yōu)化。本方法克服了上述缺點(diǎn)，具有下列優(yōu)點(diǎn)：
1. 不需要單獨(dú)純化線(xiàn)粒體，柱式法純化，操作簡(jiǎn)單快捷。
2. 得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3. 每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3-5
μg mtDNA。
4. 注意：本產(chǎn)品只適合于動(dòng)物材料，不適合于植物材料。
使用及效果
在107個(gè)細(xì)胞或1克剪碎的組織中加入0.25 mL溶液A，吹打分散，再加入0.25 mL溶液B，混勻后冰浴8分鐘，加入0.35 mL溶液C后混勻，12000 g離心10分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，離心1分鐘，用0.5 mL 的通用洗柱液洗兩次，最后用30-50 μL DNA洗脫液將mtDNA洗脫。
用本產(chǎn)品從新鮮豬肝中提取mtDNA，原液稀釋10000 倍后取10 μL做為PCR 模板， 分別用三對(duì)豬線(xiàn)粒體DNA專(zhuān)一性引物進(jìn)行擴(kuò)增， 用其中的1/2上樣電泳。電泳染料為綠如藍(lán)。
線(xiàn)粒體是合成ATP和脂肪酸的細(xì)胞器，每個(gè)細(xì)胞有多個(gè)線(xiàn)粒體，每個(gè)線(xiàn)粒體有多個(gè)基因組，例如每個(gè)釀酒酵母（S．cerevisiae）細(xì)胞里有20多個(gè)線(xiàn)粒體，人淋巴細(xì)胞有數(shù)個(gè)，肝細(xì) 胞有500-2500個(gè)，卵母細(xì)胞有上千個(gè)。除少數(shù)低等真核生物線(xiàn)粒體基因組為線(xiàn)狀DNA外，其他生物的線(xiàn)粒體基因組都是環(huán)狀DNA。線(xiàn)粒體基因組缺乏組蛋白，故無(wú)核小體。哺乳動(dòng)物的線(xiàn)粒體基因DNA沒(méi)有內(nèi)含子，幾乎每一對(duì)核苷酸都參與一個(gè)基因的組成，有許多基因的序列是重疊的。不同物種的線(xiàn)粒體基因組的大小相差懸殊，在動(dòng)物中的趨勢(shì)是物種越高等，mtDNA越小，排列越緊密。下表是常見(jiàn)物種mtDNA的大小列表
人mtDNA只有D環(huán)區(qū)（D-loop，參與復(fù)制啟動(dòng)）和另外87個(gè)bp不是編碼基因外，其余序列共編碼13個(gè)蛋白質(zhì)（細(xì)胞色素b、細(xì)胞色素氧化酶的3個(gè)亞基、ATP酶的2個(gè)亞基以及NADH 脫氫酶的7個(gè)亞基）、24個(gè)rRNA（包括1個(gè)16SrRNA、1個(gè)12SrRNA和22個(gè)tRNA）。人類(lèi) 的神經(jīng)肌肉變性疾病如Leber氏遺傳性視神經(jīng)病、帕金森病、早老癡呆癥、線(xiàn)粒體腦肌病、母系遺傳的糖尿病和耳聾等都同線(xiàn)粒體基因有關(guān)。
高等植物mtDNA長(zhǎng)度在100 Kb~2000 Kb之間，大部分由非編碼的DNA序列組成，且有許多短的同源序列，同源序列之間的DNA重組會(huì)產(chǎn)生較小的亞基因組環(huán)狀DNA，與完整的“主”基因 組共存于細(xì)胞內(nèi)，因此植物線(xiàn)粒體基因組的研究更為困難。
與細(xì)胞核DNA相比，mtDNA具有下列特點(diǎn)：①突變率高，是核DNA的10-100倍左右， 有利于檢查出在較短時(shí)期內(nèi)基因發(fā)生的變化，有利于比較不同物種的相同基因之間的差別，確定這些物種在進(jìn)化上的親緣關(guān)系；②母性遺傳(maternal inheritance)，這是由于動(dòng)物精子的細(xì)胞質(zhì)極少，子代mtDNA基本上都是來(lái)自卵細(xì)胞，因此具有相同mtDNA序列的個(gè)體必定是來(lái)自一位共同的雌性祖先。
