本產(chǎn)品在柱式細(xì)菌DNAOUT(CAT#:60802)基礎(chǔ)上改良而得的大提升級(jí)產(chǎn)品,主要用于大量快速?gòu)母鞣N革氏陽(yáng)性和革氏陰性細(xì)菌材料中提取基因組DNA。跟柱式細(xì)菌DNAOUT相比,它具有下列特點(diǎn):
1. 處理量大,一次可以處理30 mL的飽和菌液。
2. 純度高,OD260/280一般在1.8以上。不含污染和抑制劑,得到的DNA可以 不經(jīng)稀釋直接用于酶切、PCR、 real-time PCR、multiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern Blotting等各種后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
3. 產(chǎn)率一般在5 μg/mL細(xì)菌樣品。離心吸附柱最大吸附量為200 μg。
4. DNA片段長(zhǎng)度一般在20-40 Kb左右。
5. 適用范圍廣,適用于絕大多數(shù)常見的細(xì)菌材料。
對(duì)革氏陰性細(xì)菌:將30 mL過夜培養(yǎng)的細(xì)菌在50 mL離心管中離心沉淀,棄上清,加入6 mL溶液A,吹打均勻后加入3 mL 溶液B,顛倒混勻,加入5 mL自備氯仿,振蕩混勻3分鐘,室溫離心5分鐘,轉(zhuǎn)移上清到新的50 mL離心管中,加入1.5倍體積的溶液C和溶液D的混合溶液,混勻后轉(zhuǎn)移到大提離心吸附柱中,室溫放置3-5 分鐘,離心2分鐘,用10 mL通用洗柱液洗2次后,用1 mL通用預(yù)洗脫液洗1次,加1 mL DNA洗脫液洗脫即得細(xì)菌基因組DNA溶液。對(duì)革氏陽(yáng)性細(xì)菌:增加一步溶菌酶預(yù)處理步驟,其余相同。
用本產(chǎn)品提取30 mL DH5α E.coli 的基因組DNA,最后用1 mL DNA洗脫液洗脫四次, 各取10 μL上樣,在0.8%瓊脂糖凝膠和1×SuperBuffer-2中300 V電泳5分鐘后直接在UV燈下照相。使用的染料是綠如藍(lán)。DNA 產(chǎn)量是160 μg,OD260/280是1.74(實(shí)驗(yàn)編號(hào):305083)。