產(chǎn)品及特點
分枝桿菌屬(Mycobacterium)是極為古老的細菌,與人類的疾病相關(guān)的就 有25 種以上,包括引起結(jié)核病的結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteria tuberculosis)。近年來由于多重耐藥性分枝桿菌的出現(xiàn),分枝桿菌再次成為人們關(guān)心的細菌。PCR 快速診斷是目前檢測分枝桿菌的主流方法,但由于此類細菌具有十分獨特的堅硬的細胞壁,快速提取其基因組DNA 一直是十分棘手的技術(shù)問題。本產(chǎn)品就是為解決這一問題而開發(fā),具有下列特點:
1. 每克分枝桿菌濕重可以提取到3-4mg 基因組DNA。
2. 操作簡單,整個過程約60 分鐘左右,容易放量操作。
3. 適用于培養(yǎng)的分枝桿菌,也適用于含分枝桿菌的痰液等樣品。
4. 價廉物美,與國外同類產(chǎn)品相比質(zhì)量相當,但價格便宜。
使用及效果
根據(jù)樣品不同進行不同預(yù)處理(詳細步驟見操作手冊)。將150 μL 65℃預(yù)熱過的溶液A加到預(yù)處理得到的裝有分枝桿菌沉淀的離心管中,充分震蕩使細菌均勻懸浮。再向離心管中加入300 μL 溶液B(呈乳濁狀)和300 μL 自備氯仿,充分震蕩混勻。將混合液-20℃放置20-60分鐘,待凝固后進入下一步。將樣品管放室溫融化后,12000-15000 g室溫離心5分鐘,小心轉(zhuǎn)移上清到一新的離心管中。用2倍體積的無水乙醇沉淀DNA,12000-15000 g 室溫離心10分鐘。用1 mL 自備70% 乙醇洗滌DNA去除雜質(zhì),最后用50-100 μL TE緩沖液充分溶解DNA沉淀。詳細步驟請參照使用手冊。
結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)
分枝桿菌屬(Mycobacterium)是一類細長略帶彎曲的桿菌,有分枝生長的趨勢,因而 得名。本菌屬種類頗多,可分為三組:結(jié)核桿菌、非結(jié)核分枝桿菌、麻風桿菌。其中結(jié)核桿菌
(Mycobacterium tuberculosis)是引起人及動物結(jié)核。╰uberculosis)的病原菌,俗名結(jié)核桿菌(tubercle bacillus)。它是細長略帶彎曲的桿菌,有時見到分枝狀或索狀。常用Lowenstein-Jensen培養(yǎng)基培養(yǎng),生長緩慢,最適宜的生長溫度為35-37℃,pH6.5-6.8。繁 殖一代需14-18小時,2-5周才出現(xiàn)肉眼可見的菌落,典型菌落為粗糙型,奶酪狀。結(jié)核桿菌 細胞壁中含有大量脂質(zhì)(結(jié)核桿菌細胞壁所含的脂類約占細胞壁干重的60%),可防止菌體水分的丟失,故對干燥的抵抗力特別強。對化學消毒劑的抵抗力也較一般細菌強。但怕熱(對濕熱敏感)、怕酒精、怕陽光(對紫外線敏感),在液體中加熱62-63℃15分鐘,或在75%酒精中作 用數(shù)分鐘即可被殺死,直接日光照射2-7小時。結(jié)核桿菌易發(fā)生菌落、毒力和耐藥性等方面的變異。如例如用以預(yù)防結(jié)核病之卡介苗(Bacille Calmette-Guerin,BCG)是將.牛型結(jié)核桿菌(Mycobacterium bovis)繼代培養(yǎng)在膽汁培養(yǎng)基13 年,使失去毒力成為無毒株。
結(jié)核桿菌通常難以著色,故不被革氏法染色。 致病物質(zhì):結(jié)核桿菌不產(chǎn)生任何內(nèi)、外毒素以及侵襲酶。其毒力可能與下述四種物質(zhì)有關(guān):索狀因子(cord factor)、C-分枝菌酸苷酯(C-mycosides)、硫酸腦苷酯(sulfatides)分枝桿菌生長素(mycobactin)