注:上欄照片為紅細胞和血小板。
RNADOWN是一種經(jīng)去RNase處理的,能有效地促進微量RNA沉淀回收的大分子聚合物,適用于提取樣品中的微量RNA。
1.促進微量RNA的沉淀,其沉淀條件跟常規(guī)乙醇或異丙醇RNA沉淀相同,故可直接加入到樣品中促進微量RNA的沉淀和回收。
2.使用多樣,可以在核酸提取的任何步驟中加入,既可以加到提取液中,也可以加到稀釋的RNA樣品中。
3.化學(xué)惰性,不影響核酸的A260/280光吸收,不影響后續(xù)的反應(yīng)過程(如cDNA 合成RT-PCR和體外轉(zhuǎn)錄等)。
4.不含RNase,產(chǎn)品溶解在液相RNase Erasol中,檢測不到殘留的RNase。
1. 加到裂解液中使用:按10-20 μ L RNADOWN /1 mL裂解液的比例將RNADOWN加入到TRIzol和天凈沙動物RNAOUT等常用RNA提取液中,然后 按相應(yīng)的操作規(guī)程直接提取RNA。
2. 加到RNA溶液中使用:將5-10 μL RNADOWN加到待沉淀的RNA溶液中,然后
按乙醇或異丙醇沉淀RNA的相應(yīng)操作規(guī)程沉淀RNA。
圖一:10 mg和5 mg動物肌肉組織分別用加有(+)和沒有加5 μL RNADOWN(-)的 1 mL動物RNAOUT提取其總RNA。RNA沉淀最后溶解在10 μL RNASAVER 中,5 μL用于甲醛變性膠電泳。圖片結(jié)果顯示RNADOWN對微量樣品的提取有明顯促進作用。