phACE2-promoter-TA-luc (報(bào)告基因質(zhì)粒)自行研發(fā)的用于檢測(cè)人血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2 (Angiotensin converting enzyme2，ACE2)的promoter轉(zhuǎn)錄活性水平的報(bào)告基因質(zhì)粒。
phACE2-promoter-TA-luc是以pGL6-TA質(zhì)粒為模板，在其多克隆位點(diǎn)插入了human ACE2的啟動(dòng)子序列(1970bp)，可以高靈敏度地檢測(cè)human ACE2 promoter的激活水平。
ACE2是SARS冠狀病毒(SARS-CoV和SARS-CoV-2)和人類(lèi)呼吸道冠狀病毒NL63的受體。SARS-CoV/SARS-CoV-2通過(guò)其Spike蛋白受體結(jié)合域(Receptor binding domain，RBD)與ACE2的肽酶結(jié)構(gòu)域結(jié)合，參與病毒的感染過(guò)程。SARS-CoV-2 Spike蛋白與ACE2的親和力是SARS-CoV Spike蛋白與ACE2的親和力的10-20倍。
有報(bào)道干擾素(Interferon)可以上調(diào)ACE2的轉(zhuǎn)錄水平，從而可能促進(jìn)相關(guān)病毒感染。
ACE2是腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Rennin-angiotension system，RAS)的重要成員。血管緊張素(Angiotensin II，Ang II)是RAS系統(tǒng)的主要效應(yīng)分子，具有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和促進(jìn)炎癥因子表達(dá)的作用。ACE2主要是通過(guò)降解血管緊張素II生成血管緊張素1-7(angiotensin-(1-7))從而發(fā)揮機(jī)體保護(hù)功能。ACE2是在肺、心臟、腎臟和腸中表達(dá)的I型膜蛋白，其胞外域包括N端肽酶結(jié)構(gòu)域(Peptidase domain，PD)及C端Collectrin-like結(jié)構(gòu)域(CLD)。
pGL6-TA是用于在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中進(jìn)行螢火蟲(chóng)螢光素酶(firefly luciferase)報(bào)告基因檢測(cè)的新一代質(zhì)粒。該報(bào)告基因質(zhì)粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改進(jìn)，一方面對(duì)于luciferase的編碼進(jìn)行了改進(jìn)，確保能更好地在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)，同時(shí)對(duì)整個(gè)質(zhì)粒中所有可以被預(yù)測(cè)出的可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)全部進(jìn)行了適當(dāng)?shù)耐蛔兲幚恚诒３衷泄δ懿蛔兊那闆r下，使各種轉(zhuǎn)錄因子在質(zhì)粒上的非特異性結(jié)合降到最低。
phACE2-promoter-TA-luc質(zhì)粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| human ACE2 promoter | 20-1989 |
| Minimal TA promoter (pTA) | 2002-2024 |
| luc2 reporter gene | 2056-3718 |
| SV40 late poly(A) signal | 3753-3974 |
| SV40 early enhancer/promoter | 4022-4440 |
| Synthetic neomycin phosphotransferase (Neor) coding region | 4465-5259 |
| Synthetic poly(A) signal | 5284-5332 |
| Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region | 5399-5418 |
| ColE1-derived plasmid replication origin | 5656 |
| Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region | 6447-7307 |
| Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site | 7412-7565 |
| Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region | 7514-7533 |
phACE2-promoter-TA-luc質(zhì)粒(7565bp)的圖譜如下：
phACE2-promoter-TA-luc中沒(méi)有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut phACE2-promoter-TA-luc)包括：
| AatII | AclI | AflII | AscI | AsiSI | BglII | BmgBI |
| BmtI | BsiWI | BspEI | BssHII | CspCI | EcoRV | MluI |
| NdeI | NheI | NruI | PacI | PaeR7I | PflMI | PmeI |
| PspXI | RsrII | SbfI | SmaI | SnaBI | SrfI | SwaI |
| TspMI | XcmI | XhoI | XmaI | XmnI | ZraI |
phACE2-promoter-TA-luc中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut phACE2-promoter-TA-luc once)包括：
| Acc65I | G`GTAC,C | 14 | Eco53kI | GAG|CTC | 780 |
| AflIII | A`CRYG,T | 5598 | EcoNI | CCTNN`N,NNAGG | 4939 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 6519 | HindIII | A`AGCT,T | 1900 |
| ApaLI | G`TGCA,C | 5912 | KpnI | G,GTAC`C | 18 |
| AseI | AT`TA,AT | 1545 | MfeI | C`AATT,G | 3892 |
| BaeI | ,(N)5`(N)1ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5` | 4665 | NotI | GC`GGCC,GC | 6418 |
| BamHI | G`GATC,C | 3985 | PciI | A`CATG,T | 5598 |
| BciVI | GTATCC(N)5,N` | 5800 | PflFI | GACN`N,NGTC | 1390 |
| BglI | GCCN,NNN`NGGC | 5 | PmlI | CAC|GTG | 920 |
| BsaAI | YAC|GTR | 920 | PstI | C,TGCA`G | 6438 |
| BsaI | GGTCTCN`NNNN, | 1189 | PvuI | CG,AT`CG | 6890 |
| BsaXI | ,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` | 1147 | SacI | G,AGCT`C | 782 |
| BsrGI | T`GTAC,A | 2556 | SacII | CC,GC`GG | 6914 |
| BstBI | TT`CG,AA | 5334 | SalI | G`TCGA,C | 5348 |
| BstEII | G`GTNAC,C | 6445 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 5 |
| BstXI | CCAN,NNNN`NTGG | 6438 | SpeI | A`CTAG,T | 7349 |
| BstZ17I | GTA|TAC | 7030 | StuI | AGG|CCT | 4418 |
| Bsu36I | CC`TNA,GG | 6876 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 1390 |
| DraIII | CAC,NNN`GTG | 3209 |
phACE2-promoter-TA-luc質(zhì)粒中推薦使用的測(cè)序引物序列如下：
RVprimer3 (7514-7533):
CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC
phACE2-promoter-TA-luc的全序列信息:D2488 phACE2-promoter-TA-luc全序列.txt。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 包裝 |
| D2488-1µg | phACE2-promoter-TA-luc | 1μg |
| D2488-100µg | phACE2-promoter-TA-luc | 100μg |
| — | 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
本質(zhì)粒未經(jīng)碧書(shū)面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。
本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說(shuō)明：
1.首次使用1µg包裝的本產(chǎn)品時(shí)，請(qǐng)先取少量本質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，進(jìn)行質(zhì)粒小量、中量或大量抽提后再用于后續(xù)用途。抽提獲得的質(zhì)�？梢酝ㄟ^(guò)酶切電泳進(jìn)行鑒定，或通過(guò)測(cè)序進(jìn)行鑒定。
2.100µg包裝的本產(chǎn)品質(zhì)粒濃度為0.1µg/µl，共1ml�？梢灾苯佑糜诿盖谢蛘咿D(zhuǎn)染細(xì)胞。
3.以phACE2-promoter-TA-luc質(zhì)粒用常規(guī)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染細(xì)胞。檢測(cè)時(shí)可以采用螢火蟲(chóng)螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒(RG005/RG006)或雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒(RG027/RG028)。
