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JM109化學克隆感受態(tài)細胞

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 JM109化學克隆感受態(tài)細胞

 

目錄號:RTX301

儲存條件:-70℃凍存六個月

產品包裝:

貨號

RTX301-04

JM109

50×100ml

Competent cell Control Plasmid pUC18 (1 ng/μl)

10μl

產品簡介:

本公司生產的JM109感受態(tài)細胞采用經特殊工藝處理得到,可用于DNA的化學轉化。使用pUC18質粒檢測,轉化效率可達108cfu/μg,-70℃保存幾個月轉化效率不發(fā)生改變。

JM109菌株介紹:

基因型:endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+relA1 supE44 D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqI qZΔM15]

特點:用于藍白斑篩選;recA1和 endA1 的突變有利于克隆 DNA 的穩(wěn)定和高純度質粒DNA 的提取。

操作方法:(以下操作均按無菌條件的標準進行)

1取感受態(tài)細胞置于冰浴中,如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中,置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100 μl,可以根據實際情況分裝使用。應注意所用DNA體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。

以下實驗以100 μl感受態(tài)細胞為例。

2   向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA(50 μl的感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和),輕輕旋轉離心管以混勻內容物,在冰浴中靜置30分鐘。

3   將離心管置于42℃水浴中放置45秒,然后快速將管轉移到冰浴中,使細胞冷卻2-3分鐘,該過程不要搖動離心管。

4   向每個離心管中加入500 μl 無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素), 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)45分鐘(150轉/分鐘),目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達,使菌體復蘇。

5將離心管內容物混勻,吸取100 μl已轉化的感受態(tài)細胞加到含相應抗生素的SOB或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養(yǎng)12—16小時。

注:涂布用量可根據具體實驗來調整。如轉化的DNA總量較多,可取更少量轉化產物涂布平板;反之,如轉化的DNA總量較少,可取200—300 μl轉化產物涂布平板。如果預計的克隆較少,可通過離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)

注意事項:

1. 感受態(tài)細胞應保存在-70℃,不可多次凍融和放置時間過長,以避免感受態(tài)細胞的轉化效率。

2. 進行轉化操作時,應根據相應溫度及無菌條件的要求進行。

3. 為防止轉化實驗不成功,可以保留部分連接反應液,以重新轉化,將損失降到最低。

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