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DH5α化學(xué)克隆感受態(tài)細(xì)胞

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 DH5α化學(xué)克隆感受態(tài)細(xì)胞

 

● 目錄號(hào):RTX302

● 儲(chǔ)存條件:-70℃凍存六個(gè)月

● 產(chǎn)品包裝:

 

貨號(hào)

RTX302-04

DH5α

50×100ml

Competent cell Control Plasmid pUC18 (1 ng/μl)

10μl

 產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

本公司生產(chǎn)的DH5α感受態(tài)細(xì)胞采用經(jīng)特殊工藝處理得到,可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC18質(zhì)粒檢測(cè),轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108cfu/μg,-70℃保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

 DH5α菌株介紹:

基因型:supE44△lacU169(j80 lacZ△M15)hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1

特點(diǎn):一種用于鋪制與培養(yǎng)質(zhì)粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其j80 lacZ△M15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的 b-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)a互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。

● 操作方法:(以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行)

1取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無(wú)菌預(yù)冷的離心管中,置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。

以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。

2   向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(100 μl的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物,在冰浴中靜置30分鐘。

3   將離心管置于42℃水浴中放置45-90秒,然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中,使細(xì)胞冷卻2-3分鐘,該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。

4   向每個(gè)離心管中加入500 μl 無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素), 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)45分鐘(150轉(zhuǎn)/分鐘),目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。

5將離心管內(nèi)容物混勻,吸取100 μl已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無(wú)菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開(kāi)。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。

注:涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多,可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之,如轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少,可通過(guò)離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)

注意事項(xiàng):

1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃,不可多次凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),以避免感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí),應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件的要求進(jìn)行。

3. 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,可以保留部分連接反應(yīng)液,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到最低。

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