所需儀器及自備試劑:
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀/半自動(dòng)生化分析儀(比色測定波長為636nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)
3、臺式離心機(jī)
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理:
紅細(xì)胞:需按照試劑盒中說明書上紅細(xì)胞的測定方法進(jìn)行提取后測定。
動(dòng)物組織樣本:可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液,離心取上清測定。
培養(yǎng)細(xì)胞:常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測定。
具體的樣本前處理:參考我們隨貨發(fā)送的《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》以及試劑盒中詳細(xì)說明書。
操作流程:
1、酶促反應(yīng):按說明操作加入樣本100l和混合試劑,37℃準(zhǔn)確反應(yīng)10分鐘
2、加R4,3500轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,取上清
3、定磷:取上清液加入顯色劑,室溫靜置2分鐘加R6
4、室溫靜置5分鐘636nm波長,1cm光徑,比色