使用說明:
1.取適量Fluo-4 AM母液,用PBS稀釋至0.5-5μM的工作液。
注:工作液須即用即配,請勿反復凍融。
2.對于待檢測的培養(yǎng)細胞,去除培養(yǎng)液,用PBS或HBSS洗三遍。
注:因為培養(yǎng)液中的血清含有酯酶會導致Fluo-4 AM分解為Fluo-4,而酚紅會導致熒光背景增強。
3.加入Fluo-4 AM工作液,溶液量以能充分覆蓋細胞為準。
4.20℃-37℃孵育10-60分鐘進行熒光探針裝載。
注:如果是首次實驗不能確定孵育溫度和時間,建議先嘗試37℃孵育30分鐘,觀察熒光效果。如果細胞死亡較多,則適當縮短時間或降低溫度;如果熒光強度太弱,則適當延長時間。
5.隨后用PBS或HBSS洗滌3次,洗滌后可以考慮適當再孵育20-30分鐘以確保Fluo-4 AM在細胞內完全轉變成Fluo-4。
6.如有需要,可以使用適當藥物來刺激細胞。
7.用激光共聚焦顯微鏡、熒光酶標儀、熒光分光光度計或流式細胞儀等熒光檢測儀器檢測Fluo-4的熒光,以確定細胞內鈣離子濃度的變化。
包裝清單:
產品編號 | 產品名稱 | 包裝 |
1060 | Fluo-4 AM(鈣離子熒光探針,2mM) | 25μl |
1060 | 說明書 | 1份 |
保存條件:
-20℃避光保存,6個月有效。
注意事項:
Fluo-4 AM遇水極易分解,建議第一次使用時,母液分裝并密封保存,同時注意保持干燥。
Fluo-4 AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內,可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
探針的工作濃度、細胞量、孵育溫度和時間等需要根據(jù)不同實驗預先摸索。
熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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