注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
XOD（EC 1.17.3.2）催化黃嘌呤氧化生成尿酸和超氧陰離子，是活性氧主要來(lái)源之一；同時(shí)也是核苷酸代謝的關(guān)鍵酶之一。XOD主要分布于哺乳動(dòng)物的心，肺，肝臟等組織中，當(dāng)肝功能受損時(shí)，XOD大量釋放到血清中，對(duì)肝損害的診斷具有特異性的意義。
測(cè)定原理：
XOD催化黃嘌呤產(chǎn)生尿酸，尿酸在290nm下有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：60mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×4瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
操作步驟：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至290nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 XOD檢測(cè)工作液的配制：用時(shí)在每瓶試劑二中加入15mL試劑一，充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用；
3、測(cè)定前將XOD檢測(cè)工作液37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃（其它物種）水浴10min。
4、取1mLXOD檢測(cè)工作液于1mL石英比色皿中，再加入35μL樣本，混勻，室溫下立即測(cè)定290nm下的初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，計(jì)算ΔA＝A2-A1。
XOD活性計(jì)算：
1、血清（漿）XOD計(jì)算：
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。
XOD（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=2424×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中XOD計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。
XOD（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr)÷T =2424×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。
XOD（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T=2424×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每一萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個(gè)酶活力單位。
XOD（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=4.848×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.035×10-3 L；ε：尿酸摩爾消光系數(shù)，1.22×104 L/ mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn)。
