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植物類黃酮測試盒(比色法)

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    意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

類黃酮是一類多苯化合物,屬于植物次生代謝物,對人體具有消炎,抗菌,降血脂,清除體內(nèi)羥自由基,預防癌癥等作用。

測定原理

在堿性亞硝酸鹽溶液中,類黃酮與鋁離子形成在510nm處有特征吸收峰的紅色絡合物,測定樣品提取液在510nm處的吸光值,即可計算樣品類黃酮含量。

自備實驗用品及儀器

天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、蒸餾水。

試劑組成和配制

提取液:60%乙醇,自備。

試劑一:液體2mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體2mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:液體20mL×1瓶,4℃保存。

類黃酮提取

將樣本烘干至恒重,粉碎,過40目篩之后,稱取約0.02g,加入2mL提取液,60℃振蕩提取2h10000g,25℃,離心10min,取上清待測。

測定操作表

 

空白管

測定管

樣本待測液µL

 

540

蒸餾水µL

540

 

試劑一µL

30

30

混勻,25靜置6min

試劑二µL

30

30

混勻,25靜置5min

試劑三µL

400

400

混勻,25靜置15 min,測定510nm吸光值。ΔA=A測定-A空白,空白管只要做一管。

 

類黃酮含量計算公式

標準曲線:y = 5.02x+0.0007,R2 = 0.9996

類黃酮含量(mg/g 干重=ΔA -0.0007÷5.02÷(W÷V樣總)

= 0.398×ΔA -0.0007÷W

V樣總:加入提取液體積,2mL; V樣:反應中樣品體積,0.54mL; W:樣品質(zhì)量,g

最低檢出限為10µg/g。

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