注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
類黃酮是一類多苯化合物,屬于植物次生代謝物,對人體具有消炎,抗菌,降血脂,清除體內(nèi)羥自由基,預防癌癥等作用。
測定原理:
在堿性亞硝酸鹽溶液中,類黃酮與鋁離子形成在510nm處有特征吸收峰的紅色絡合物,測定樣品提取液在510nm處的吸光值,即可計算樣品類黃酮含量。
自備實驗用品及儀器:
天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:60%乙醇,自備。
試劑一:液體2mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體2mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體20mL×1瓶,4℃保存。
類黃酮提取:
將樣本烘干至恒重,粉碎,過40目篩之后,稱取約0.02g,加入2mL提取液,60℃振蕩提取2h,10000g,25℃,離心10min,取上清待測。
測定操作表:
| 空白管 | 測定管 |
樣本待測液(µL) |
| 540 |
蒸餾水(µL) | 540 |
|
試劑一(µL) | 30 | 30 |
混勻,25℃靜置6min | ||
試劑二(µL) | 30 | 30 |
混勻,25℃靜置5min | ||
試劑三(µL) | 400 | 400 |
混勻,25℃靜置15 min,測定510nm處吸光值。ΔA=A測定-A空白,空白管只要做一管。 |
類黃酮含量計算公式:
標準曲線:y = 5.02x+0.0007,R2 = 0.9996
類黃酮含量(mg/g 干重)=(ΔA -0.0007)÷5.02÷(W÷V樣總)
= 0.398×(ΔA -0.0007)÷W
V樣總:加入提取液體積,2mL; V樣:反應中樣品體積,0.54mL; W:樣品質(zhì)量,g
最低檢出限為10µg/g。