測(cè)定意義：
蛋白質(zhì)含有三種含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和Cys。其中，Cys是唯一一種含有巰基的含硫氨基酸，從甲硫氨酸轉(zhuǎn)化而來(lái)，并且可與胱氨酸互相轉(zhuǎn)化。Cys參與蛋白質(zhì)二硫鍵的形成，經(jīng)常是蛋白質(zhì)活性中心的組成部分，還可以為其它生理生化反應(yīng)提供巰基。此外，Cys大量積聚在皮膚和粘膜表面，在角蛋白生成中維持重要的琉基酶的活性，并且補(bǔ)充硫基，以維持皮膚的正常代謝，調(diào)節(jié)表皮最下層的色素細(xì)胞生成的底層黑色素。具有美白、解毒、改善炎癥和過(guò)敏性皮膚等作用。
測(cè)定原理：
半胱氨酸與磷鎢酸反應(yīng)，可將磷鎢酸還原成鎢藍(lán)，在600nm處有吸收峰，通過(guò)測(cè)定鎢藍(lán)的生成量，即可計(jì)算出半胱氨酸含量。
自備儀器和用品：
酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、酶標(biāo)板和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支，1μmol/mL半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
樣品中半胱氨酸提�。�
1. 液體樣品：取50μL液體樣品，加試劑一450μL，充分混勻，11000 rpm 4℃離心10min，取上清液，即待測(cè)液。
2. 組織樣品：稱(chēng)取約50mg組織，加入500μL試劑一，冰上充分研磨，11000 rpm 4℃離心10 min，取上清液，即待測(cè)液。
測(cè)定：
1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到600 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 空白孔：取酶標(biāo)板，在空白孔中加入20μL蒸餾水，90 μL試劑二，90 μL試劑三，室溫靜置15min，于600 nm測(cè)定光吸收，記為A空白。
3. 標(biāo)準(zhǔn)孔：取酶標(biāo)板，在空白孔中加入20μL標(biāo)準(zhǔn)品，90 μL試劑二，90 μL試劑三，室溫靜置15min，于600 nm測(cè)定光吸收，記為A標(biāo)準(zhǔn)。
4. 測(cè)定孔：取酶標(biāo)板，在空白孔中加入20μL待測(cè)液，90 μL試劑二，90 μL試劑三，室溫靜置15min，于600 nm測(cè)定光吸收，記為A測(cè)定。
半胱氨酸含量計(jì)算：
1. 按液體樣品的體積計(jì)算：
半胱氨酸含量(μ mol/mL)
=C標(biāo)準(zhǔn)×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)×(500μL÷20μL)×（1mL÷50 μL）
=500×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)
C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，1μmol/mL；V標(biāo)準(zhǔn)：加入標(biāo)準(zhǔn)品體積（mL），20μL=0.02 mL。
2. 按鮮重計(jì)算：
半胱氨酸含量(μ mol/g FW)
= C標(biāo)準(zhǔn)×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)×(500μL÷20μL)÷W
=25×(A測(cè)定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白) ÷W
W：組織樣品質(zhì)量（g）。
