NO化學(xué)性質(zhì)活潑,體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化為硝酸鹽(NO3¯)和亞硝酸鹽(NO2¯),血清(NO3¯)與(NO2¯)濃度之和(NO3¯┼NO2¯)才能準(zhǔn)確代表體內(nèi)(NO)水平。血清(NO3¯┼NO2¯)含量測(cè)定,國內(nèi)有的單位采用金屬鎘還原法,但該法操作繁瑣(血清需除蛋白),反應(yīng)不易控制(金屬鎘可將NO2¯進(jìn)一步還原),且不能完全將NO3¯還原為 NO2¯,準(zhǔn)確性差。
本測(cè)試法為一種靈敏、簡(jiǎn)便、快速、穩(wěn)定、易推廣的方法。
產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:全程約2小時(shí),可測(cè)100例以上樣本。
2、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個(gè)月有效。
3、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
4、回收試驗(yàn): X =101%。
5、受外界影響因素。焊蓴_因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
6、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血液、組織、細(xì)胞、各種培養(yǎng)細(xì)胞、腦脊液、胸水、腹水、尿液、胃液、植物組織以及各種水產(chǎn)效果均佳。
所需儀器及自備試劑:
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀/半自動(dòng)生化分析儀(比色測(cè)定波長為550nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)
3、漩渦混勻器
4、臺(tái)式離心機(jī)
5、微量移液器
樣本收集與前處理:
血清(漿)可直接測(cè)定。
紅細(xì)胞:需按照試劑盒中說明書上紅細(xì)胞的測(cè)定方法進(jìn)行提取后測(cè)定。
動(dòng)物組織樣本:可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液,離心取上清測(cè)定。
培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織:常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測(cè)定。
具體的樣本前處理:參考我們隨貨發(fā)送的《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》以及試劑盒中詳細(xì)說明書。
操作流程:
1、按步驟加入樣本和R1、R2混合試劑,37℃水浴60分鐘
2、加入R3、R4,抽提室溫靜置40分鐘,3500~4000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘
3、取上清0.5 ml,加入顯色劑,靜置10分鐘,550nm波長,1cm光徑,比色