羥脯氨酸在膠原蛋白中占13.4%,在彈性蛋白中占極少量,其它蛋白中均不存在。而膠原蛋白大多分布在皮膚、腱、軟骨、血管等處,因此羥脯氨酸的量能反映結(jié)締組織疾病的膠原代謝情況。有人把皮膚中羥脯氨酸的測(cè)定作為篩選抗衰老藥物的一個(gè)指標(biāo)。在發(fā)育階段隨年齡的增長(zhǎng),其羥脯氨酸在尿中排泄增加,而發(fā)育停止后穩(wěn)定。老年人的羥脯氨酸比年輕人要少。鼠患有自發(fā)性高血壓及繼發(fā)性高血壓時(shí),尿中羥脯氨酸含量增加。手術(shù)創(chuàng)傷會(huì)導(dǎo)致尿羥脯氨酸排泄量的增加,因高脂、低蛋白、酒精中毒及毒物、營(yíng)養(yǎng)不良,或肝細(xì)胞變性壞死,通過(guò)炎癥使纖維增加,分割肝小葉,導(dǎo)致肝硬化。肝纖維化時(shí),肝內(nèi)主要增加的成分為膠原纖維,羥脯氨酸為膠原纖維所特有,測(cè)定肝羥脯氨酸的含量,可換算成肝膠原蛋白的含量,以反映肝纖維化程度。膠原纖維分解主要依賴膠原酶和其它蛋白酶的作用,其分解產(chǎn)物羥脯氨酸從尿中排出,測(cè)定尿羥脯氨酸的含量,可反應(yīng)膠原降解的情況。通過(guò)測(cè)定組織及尿中羥脯氨酸的含量,一方面可以判斷纖維化程度,同時(shí)可以篩選預(yù)防與治療的藥物。
產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下:
1、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個(gè)月有效。
2、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=2.1%。
3、回收試驗(yàn): X =102%。
4、受外界影響因素小:干擾因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
5、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血清(漿)、組織 、尿液以及各種水產(chǎn)等,效果均佳。
所需儀器及自備試劑:
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀/半自動(dòng)生化分析儀(比色測(cè)定波長(zhǎng)為550nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為60℃)
3、臺(tái)式離心機(jī)
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理:
尿液、血清(漿):可直接測(cè)定。
動(dòng)物組織樣本:可直接準(zhǔn)確稱取組織重量加堿水解液進(jìn)行水解。
具體的樣本前處理:參考我們隨貨發(fā)送的《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》以及試劑盒中詳細(xì)說(shuō)明書(shū)。
操作流程:
1、準(zhǔn)確稱取組織或直接取血清、尿液樣本
2、調(diào)PH至中性:按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行調(diào)PH,最后定容至10 ml,加活性碳離心取上清待測(cè)
3、取上清1 ml加R1靜置10分鐘加R2靜置5分鐘,加R3,60℃水浴15分鐘
4、3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,取上清550nm波長(zhǎng),1cm光徑,比色