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硫氧還蛋白過氧化物酶(TPX)試劑盒

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    意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

TPX屬于過氧化物酶家族,在體內主要通過還原過氧化氫和一些氫過氧化物來實現抗氧化作用,功能與GPX類似,也是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)關鍵酶之一。TPX普遍存在于各種生物體內,如酵母、植物、動物、原生動物、寄生蟲、細菌和古細菌,在進化上高度保守。TPX與細胞增殖、分化、細胞凋亡及腫瘤發(fā)生調控密切相關。TPX的主要功能包括細胞脫毒、抗氧化和調節(jié)由過氧化氫介導的信號轉導和免疫反應。

 

測定原理:

TPX催化H2O2氧化二硫蘇糖醇(DTT),H2O2的吸收波長為240nm,通過測定240nm吸光度的下降速率,即可計算出TPX活性。


自備儀器和用品:

紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節(jié)移液器、1mL石英比色皿和蒸餾水

 

試劑組成和配制:

試劑一:液體50mL×1瓶,室溫保存。

試劑二:液體50mL×1瓶,- 20保存。

試劑三:液體5mL×1瓶,4。

 

粗酶液提取

1. 組織:按照組織質量(g試劑一(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。8000g,4離心10min,取上清置冰上待測。

2. 細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4,離心10min,取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體:直接測定。

TPX測定操作:

1. 分光光度計預熱30min,調節(jié)波長到240 nm,蒸餾水調零。

2.試劑二置于25(一般物種)或者37(哺乳動物)水浴預熱30 min。

3.1mL石英比色皿,加入20 μ L上清液,900 μ L試劑二,80 μ L試劑三,迅速混勻后于240 nm測定10 s130 s吸光度,記為A1A2

 

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