ATP酶存在于組織細(xì)胞膜及細(xì)胞器膜上,是生物膜上的一種蛋白酶,它在物質(zhì)運(yùn)送、能量轉(zhuǎn)換以及信息傳遞方面具有重要的作用。
ATP酶可分解ATP生成ADP及無(wú)機(jī)磷,測(cè)定無(wú)機(jī)磷的量可判斷ATP酶活力的高低
產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:全程約50分鐘,可測(cè)100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20l~50l即可測(cè)紅細(xì)胞膜中的ATP酶,只需5mg左右組織就可測(cè)組織勻漿中的ATP酶、0.2g組織可測(cè)線粒體及微粒體中的ATP酶。
3、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個(gè)月有效。
4、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
5、回收試驗(yàn): X =103.3%。
6、受外界影響因素。焊蓴_因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
7、測(cè)試面廣:可測(cè)試高速冷凍離心后的紅細(xì)胞膜、組織細(xì)胞膜、線粒體、微粒體的ATPase。
所需儀器及自備試劑:
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀/半自動(dòng)生化分析儀(比色測(cè)定波長(zhǎng)為660nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)
3、臺(tái)式離心機(jī)
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理:
紅細(xì)胞:需按照試劑盒中說(shuō)明書(shū)上紅細(xì)胞的測(cè)定方法進(jìn)行提取后測(cè)定。
動(dòng)物組織樣本:可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液,離心取上清測(cè)定。
培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織:常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測(cè)定。
具體的樣本前處理:參考我們隨貨發(fā)送的《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》以及試劑盒中詳細(xì)說(shuō)明書(shū)。
操作流程:
1、酶促反應(yīng):按步驟加入樣本和混合試劑,37℃浴溫10分鐘,加入R7,混勻, 3000~4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘
2、定磷:取上清200l,加入2 ml定磷劑 37℃水浴30分鐘
3、660nm波長(zhǎng),1cm光徑,比色