ATP酶存在于組織細胞膜及細胞器膜上,是生物膜上的一種蛋白酶,它在物質運送、能量轉換以及信息傳遞方面具有重要的作用。
ATP酶可分解ATP生成ADP及無機磷,測定無機磷的量可判斷ATP酶活力的高低
產品優(yōu)點如下:
1、快速簡便:全程約50分鐘,可測100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20l~50l即可測紅細胞膜中的ATP酶,只需5mg左右組織就可測組織勻漿中的ATP酶、0.2g組織可測線粒體及微粒體中的ATP酶。
3、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個月有效。
4、再現性好:變異系數CV=1.7%。
5、回收試驗: X =103.3%。
6、受外界影響因素。焊蓴_因素少,重復性強。
7、測試面廣:可測試高速冷凍離心后的紅細胞膜、組織細胞膜、線粒體、微粒體的ATPase。
所需儀器及自備試劑:
1、分光光度計/酶標儀/半自動生化分析儀(比色測定波長為660nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)
3、臺式離心機
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理:
紅細胞:需按照試劑盒中說明書上紅細胞的測定方法進行提取后測定。
動物組織樣本:可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液,離心取上清測定。
培養(yǎng)細胞、細菌、植物組織:常用PBS作為勻漿介質破碎后離心取上清測定。
具體的樣本前處理:參考我們隨貨發(fā)送的《實驗方法學》以及試劑盒中詳細說明書。
操作流程:
1、酶促反應:按步驟加入樣本和混合試劑,37℃浴溫10分鐘,加入R7,混勻, 3000~4000轉/分離心10分鐘
2、定磷:取上清200l,加入2 ml定磷劑 37℃水浴30分鐘
3、660nm波長,1cm光徑,比色