- 介紹： 基 因 型endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqIqZΔM15]
- 簡 要 說 明
- JM109菌株來源于E.coli K strain，是提取高質量DNA的理想菌株，recA1 和 endA1 的突變有利于克隆DNA 的穩(wěn)定和高純度質粒 DNA 的提取。攜帶 hsdR17基因型背景，使得異源DNA不被內源核酸酶系統(tǒng)降解。laqI qZΔM15的存在使JM109可用于構建克隆，藍白斑篩選實驗；High5TM系列JM109感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，經pUC19質粒檢測轉化效率可達1×109cfu/μg。
- 操 作 說 明
- 1.JM109感受態(tài)細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時迅速插入冰中），加入目的DNA（質�；蜻B接產物）并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。
- 2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
- 3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。
- 4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
- 5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
- 注 意 事 項
- 1.感受態(tài)細胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化，融化后8分鐘內加入質粒，否則會影響轉化效率。
- 2.混入質�；蜻B接產物時應輕柔操作。
- 3.轉化高濃度的質�；蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。
- 儲存條件： -80℃
- 用途： 克隆感受態(tài)細胞
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