- 介紹： 基 因 型TetRΔ(mcrA)183 Hte[F′{proAB lacIq lacZM15Tn10(TetR)AmyCamR}](mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44thi-1 recA1 gyrA96 relA1
- 簡 要 說 明XL2-Blue菌株來源于XL1-Blue菌株，為Hte(high transformation efficiency)基因型，Hte是Stratagene開發(fā)的特異性提高感受態(tài)轉化效率及大質粒轉化能力的宿主菌基因型，已成功應用于40kd質粒的構建。Hte使得XL2-Blue適用于大質粒DNA和重組產(chǎn)物的轉化，降低片段大小的偏愛性，多用于文庫構建。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質粒DNA的提取。hsdSMR突變導致EcoK核酸內切酶系統(tǒng)缺失，增強了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質量。 lacZΔM15 的存在使XL2-Blue菌株可用于藍、白斑篩選。此菌株具有四環(huán)素和氯霉素抗性。High5TM系列XL2-Blue感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質粒檢測轉化效率>1×109cfu/μg。
- 操 作 說 明
- 1.XL2-Blue感受態(tài)細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時迅速插入冰中），加入目的DNA（質�；蜻B接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。
- 2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
- 3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
- 4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
- 5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少14h。
- 注 意 事 項
- 1. 感受態(tài)細胞最好在冰上融化。
- 2.混入質�；蜻B接產(chǎn)物時應輕柔操作。3.轉化高濃度的質�；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少最終用于涂板的菌量。
- 儲存條件： -80℃
- 用途： 克隆感受態(tài)細胞
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