產(chǎn)品介紹:
基 因 型F- gyrA462 endA1 glnV44 (sr1-recA)mcrBmrrhsdS20(rB-,mB-)ara14galK2lacY1proA2rpsL20(Smr) xyl5 Δleu mtl1簡 要 說 明DB3.1大腸桿菌菌株基因組中含有 gyrA462 基因,賦予其對ccdB毒性基因的抗性,特別適用于構(gòu)建或擴(kuò)繁含有ccdB基因的質(zhì)粒載體(例GATEWAYSystem vector) ,此菌株具有鏈霉素抗性。High5TM系列DB3.1感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,經(jīng)pUC19檢測轉(zhuǎn)化效率>108 cfu/μg DNA。
操 作 說 明:
1.DB3.1感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化(或放手心或室溫片刻,待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中),加入目的DNA并用指尖輕輕撥打管底混勻(避免用槍吸打),冰上靜置25分鐘。
2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
注 意 事 項(xiàng):
1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過長,長時(shí)間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入目的DNA時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
儲存條件: -80℃
用途: 克隆感受態(tài)細(xì)胞