- 介紹： 基 因 型F- mcrB mrr hsdS20(rB- mB-) recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1 rpsL20(strR) glnV44λ-
- 簡(jiǎn) 要 說(shuō) 明
- HB101菌株是 E. Coli K12菌株和 E. Coli B 菌株的雜合產(chǎn)物（同時(shí)也是Stbl3的原始菌株）。recA13突變可有效抑制長(zhǎng)片段末端重復(fù)區(qū)的重組，降低錯(cuò)誤重組的概率；但不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液。hsdS20背景使HB101缺失內(nèi)切酶系統(tǒng)，增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質(zhì)量；此菌株具有鏈霉素抗性；不存在lacIqZΔM15，不可用于藍(lán)、白斑篩選。High5TM系列HB101感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>5×108cfu/μg。
- 操 作 說(shuō) 明
- 1.HB101感受態(tài)細(xì)胞放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中，加入目的DNA（質(zhì)�；蜻B接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。
- 2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
- 3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。
- 4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
- 5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。
- 注 意 事 項(xiàng)1.感受態(tài)細(xì)胞處于冰水混合狀態(tài)時(shí)立即插入冰上。2.混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)�；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。操作過(guò)程中勿將感受態(tài)暴露于氧化性環(huán)境中，例如超凈臺(tái)應(yīng)將臭氧排凈后再使用。
- 儲(chǔ)存條件： -80℃
- 用途： 克隆感受態(tài)細(xì)胞
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