- 介紹: 基 因 型F- mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara, leu)7697 galE15 galK λ- rpsL nupG
- 簡 要 說 明DH10B菌株來源于MC1061菌株,mcrA、mcrBC及mrr突變使DH10B菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(Therefore , genomic DNA , both prokaryotic and eukaryotic, can be cloned efficiently in DH10B)。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。φ80dlacZ∆M15 marker的存在使DH10B可用于藍(lán)白斑篩選,rpsL賦予其鏈霉素抗性。 High5TM系列DH10B感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>108cfu/μg。
- 操 作 說 明
- 1.DH10B感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化(或放手心或室溫片刻,待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中),加入目 的DNA(質(zhì)粒或連接產(chǎn)物)并用手撥打EP管底輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。
- 2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
- 3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
- 4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
- 5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少13h。
- 注 意 事 項(xiàng)
- 1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。
- 2.混入質(zhì);蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
- 儲(chǔ)存條件: -80℃
- 用途: 克隆感受態(tài)細(xì)胞
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