滾環(huán)擴增(rolling circle amplification,RCA)是近幾年發(fā)展起來的一種核酸恒溫擴增方法。以環(huán)狀DNA為模板,通過一個短的DNA引物(與部分環(huán)狀模板互補),在phi29 DNA 聚合酶催化下將dNTPs轉變成單鏈DNA,此單鏈DNA包含成百上千個重復的模板互補片段。這種方法不僅可以直接擴增DNA和RNA,還可以實現對靶核酸的信號放大,靈敏度達到一個拷貝的核酸分子,因此在核酸檢測中具有很大的應用價值和潛力。 因其高靈敏度、高特異性和可操作性,RCA技術在基礎研究、實際檢測、醫(yī)療診斷及納米材料等方面都有很好的應用,結合細胞原位檢測、單核苷酸多態(tài)性SNPs,蛋白質分析、免疫芯片和全基因組的擴增等研究都能發(fā)揮其巨大的優(yōu)勢。
本滾環(huán)擴增試劑盒配備的phi29 DNA聚合酶具有鏈置換和連續(xù)合成特性,可連續(xù)合成長達70kb的DNA片段。另外,該酶具有3’→5’外切酶校讀功能,合成的DNA片段保真性高。試劑盒配備的Random Hexamers為6堿基隨機引物可對目標分子進行指數放大(通常放大10000倍)。
主要特征
高靈敏度:單引物RCA的擴增效率成指數擴大,可達104-105。
操作簡單:恒溫擴增,程序簡單化。
儀器簡單:只需維持恒溫的水浴鍋。
應用廣泛:可廣泛應用于基礎研究和醫(yī)療診斷等領域。
儲存 :-20℃可保存3年,避免反復凍融。
功能測試:如下圖