本試劑盒采用特制的進口DNA吸附柱和獨特的緩沖液系統(tǒng),特別適合于從口腔咽拭子中分離純化基因組DNA。各種來源樣品裂解消化處理后DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜(特別配備了Carrier RNA可以從體系中輕松捕獲微量核酸),再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,將鹽、細胞代謝物、蛋白等雜質去除,最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈的基因組DNA從硅基質膜上洗脫。純化后的DNA無雜質和PCR抑制劑,可直接適用于PCR分析。
產品特點:
1、配備了Carrier RNA 用于充分收集特別微量DNA。
2、提取的DNA純度高,質量穩(wěn)定可靠,可適用于各種常規(guī)操作,包括PCR、酶切、測序、Southern 雜交等。
自備試劑:無水乙醇
產品信息:
產品特點:
1、配備了Carrier RNA 用于充分收集特別微量DNA。
2、提取的DNA純度高,質量穩(wěn)定可靠,可適用于各種常規(guī)操作,包括PCR、酶切、測序、Southern 雜交等。
自備試劑:無水乙醇
產品信息:
組分 | 保存 | 50次 |
裂解液 ML | 室溫 | 20ml |
結合液 CB | 室溫 | 20ml |
抑制物去除液 IR | 室溫 | 25ml |
漂洗液 WB | 室溫 | 15ml(第一次使用前加入 60ml 無水乙醇) |
Carrier RNA | -20℃ | 50ul |
洗脫緩沖液 EB | 室溫 | 10ml |
蛋白酶 K(20mg/ml) | 室溫 | 1ml |
吸附柱 AC | 室溫 | 50個 |
收集管 | 室溫 | 50個 |
使用方法
提示:第一次使用前請先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 無水乙醇,充分混勻, 加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇,以免多次加入! 取樣:取一根醫(yī)用消毒棉簽(手不要碰觸脫脂棉部位),伸進口腔,緊靠臉頰內側來回 刮拭 20 次(不時旋轉棉棒),需充分接觸口腔粘膜。 注意:避免用手觸及棉簽,采集前可先用清水輕輕漱口。為防止樣本被食物或者飲料 污染,取樣前 30 min 內應該避免進食或者飲水。
操作: 1、用剪刀將棉簽部分從其桿上剪下,放入 2ml 離心管中,加入 400μl 裂解液 ML。
2、再加入 20μl 的蛋白酶 K (20mg/ml)溶液,立刻渦旋振蕩充分混勻,56℃放置 30 min, 期間每 10 min 渦旋混勻 10 sec。
3、加入 400μl 結合液 CB,立刻渦旋振蕩充分混勻,70℃放置 10 min(擠壓去除拭子, 將盡可能多的裂解液轉移至新的離心管中)。 如果拭子上細胞數量少,導致提取的基因組 DNA 產量過低, 可以在 400μl 結合液 CB 中加入 1μl Carrier RNA 儲存溶液。
4、冷卻后加 200μl 無水乙醇,立刻渦旋振蕩充分混勻。簡短離心以除去管蓋內壁的液 滴,收集所有的液體到管底。(如果周圍環(huán)境高于 25℃,乙醇需要冰上預冷后再加入)
5、將上一步混合物中加入一個吸附柱 AC 中(吸附柱放入收集管中),12,000rpm 離心 30-60 sec,倒掉收集管中的廢液。
6、加入 500μl 抑制物去除液 IR,12,000rpm 離心 30 sec,棄廢液。
7、加入 500μl 漂洗液 WB(請先檢查是否已加入無水乙醇!),12,000rpm 離心 30 sec, 棄掉廢液。
8、重復操作步驟 7。
9、將吸附柱 AC 放回空收集管中,12,000rpm 離心 2 min,將吸附柱置于室溫放置數分 鐘,以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。
10、取出吸附柱 AC,放入一個干凈的離心管中,在吸附膜的中間部位加 20-50μl 洗脫緩 沖液 EB(洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預熱效果更好),室溫放置 1 min, 12,000rpm 離心 1 min。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,室溫放置 1 min, 12,000rpm 離 心 1 min 。 洗 脫 體 積 越 大 , 洗 脫 效 率 越 高 , 如 果 需 要 DNA 濃度較高,可以適當減少洗脫體積,但是最小體積不應少于 20μl,體積過 小降低 DNA 洗脫效率,減少 DNA 產量。(注意:DNA 產物應保存在-20℃,以防 DNA 降解) 注意:DNA 濃度及純度檢測 得到的基因組 DNA 片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有 關。回收得到的 DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。 DNA 應在 OD260 處有顯著吸收峰,OD260 值為 1 相當于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、 40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/OD280比值應為 1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而 使用滅菌水比值會偏低,因為 pH 值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低
我要詢價
*聯系方式:
(可以是QQ、MSN、電子郵箱、電話等,您的聯系方式不會被公開)
*內容: