本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)，提取干血斑中的基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司特有新型材料，高效、專(zhuān)一吸附DNA，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。提取的基因組DNA片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、熒光定量PCR，文庫(kù)構(gòu)建、Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。
樣本采集及存和運(yùn)送：
樣本：按照濾紙干血斑采集方法進(jìn)行采集。
樣本保存：經(jīng)上述采集的待測(cè)樣本可立即用于處理，或在密封，干燥（濕度低于30%），2～8℃條件下保存（此條件下可保存5年）。樣本運(yùn)送時(shí)應(yīng)將濾紙干血斑密封，采用泡沫箱加冰運(yùn)輸。
產(chǎn)品信息：
樣本：按照濾紙干血斑采集方法進(jìn)行采集。
樣本保存：經(jīng)上述采集的待測(cè)樣本可立即用于處理，或在密封，干燥（濕度低于30%），2～8℃條件下保存（此條件下可保存5年）。樣本運(yùn)送時(shí)應(yīng)將濾紙干血斑密封，采用泡沫箱加冰運(yùn)輸。
產(chǎn)品信息：
| 組分 | 保存 | 100次 |
| DNA LysisI | 室溫 | 120ml |
| 結(jié)合液 CB | 室溫 | 30ml |
| 抑制物去除 IR | 室溫 | 50ml |
| 漂洗液 WB | 室溫 | 25ml（第一次使用前加入 100ml 無(wú)水乙醇） |
| 洗脫液 EB | 室溫 | 15ml |
| 蛋白酶 K | 室溫 | 1mlx2 |
| 吸附柱 AC | 室溫 | 100個(gè) |
| 收集管 2ml | 室溫 | 100個(gè) |
使用方法
使用前請(qǐng)先在漂洗液 WB 中加入無(wú)水乙醇。 1、取三片 3×3mm 的干血斑樣品到 1.5ml 的離心管（自備）中。 2、加入 200µl 的 DNA LysisI。 3、加入 20µl 蛋白酶 K 溶液，渦旋震蕩 10 sec 鐘混勻后，放入預(yù)熱至 56℃的恒溫震蕩器 中，900 rpm 恒溫震蕩 1 小時(shí)。 4、短暫離心，加入 200µl 的結(jié)合液 CB，震蕩 10 sec 鐘充分混勻。將離心管放入預(yù)熱至 70℃的恒溫震蕩器中，900rpm 恒溫震蕩 10 min。孵育結(jié)束后簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi) 壁的液滴。 注意: 加入結(jié)合液 CB 時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，一般 70℃放置時(shí)會(huì)消失，不會(huì)影響后 續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說(shuō)明細(xì)胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取 DNA 量少和提取出 的 DNA 不純。 5、加入 100µl 的無(wú)水乙醇。如果室溫超過(guò) 25℃，請(qǐng)將乙醇置冰上預(yù)冷。輕輕顛倒混勻 樣品，室溫放置 5 min，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的液滴。 6、將上一步所得溶液都加到一個(gè)吸附柱 AC 中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm 離 心 30 sec，棄收集管廢液，將吸附柱 AC 放回收集管中。 7、向吸附柱 AC 中加入 500µl 抑制物去除劑 IR，12.000rpm 離心 30 sec，棄收集管廢液， 將吸附柱 AC 放回收集管中。 8、向吸附柱 AC 中加入 700µl 漂洗液 WB（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇）， 12,000rpm 離心 30 sec，棄收集管廢液，將吸附柱 AC 放回收集管中。 9、向吸附柱 AC 中加入 500µl 漂洗液 WB，12,000rpm 離心 30 sec，棄收集管廢液。 10、將吸附柱 AC 放回廢液收集管中，12,000rpm 離心 2 min，倒掉廢液。將吸附柱 AC 置于室溫放置 2-5 min,以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。 注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后 續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR 等）實(shí)驗(yàn)。 11、將吸附柱 AC 轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加 20-50µl 洗脫 緩沖液 EB，室溫放置 2-5 min，12,000rpm 離心 2 min，將溶液收集到離心管中。 注意：洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于 20μl，體積過(guò)小影響回收效率。為增加基因組 DNA 的得率，可將離心得到的 DNA 溶液再次加入吸附柱 AC 中，室溫放置 2 min， 12,000rpm(~13,400×g)離心 2 min。洗脫液的 pH 值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用水 做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍內(nèi)(可以用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)到此范圍)， pH 值低于 7.0 會(huì)降低洗脫效率；且 DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解。
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