茜素紅S染色是一種常用的染色方法，廣泛用于成骨細(xì)胞分化、骨細(xì)胞或組織病理生理的研究。
茜素紅S是一種蒽醌類衍生物，能和多種金屬離子螯合生成穩(wěn)定的橙紅色或深紅色的復(fù)合物，是一種良好的金屬指示劑，也可作為吸光度法測定金屬離子的顯色劑，還可作為酸堿指示劑，或用于極譜法測定金屬離子。
針對不同樣品特點(diǎn)，全新推出一系列茜素紅S染色液產(chǎn)品，利用染色液酸堿性和濃度的區(qū)別，可以分別對細(xì)胞外基質(zhì)鈣質(zhì)沉積、細(xì)胞內(nèi)鈣質(zhì)沉積和成骨細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)鈣質(zhì)進(jìn)行染色，方便您根據(jù)實(shí)際需求進(jìn)行選購。
染色原理：
茜素紅S可與碳酸鈣或磷酸鈣中的鈣鹽螯合形成橙紅色復(fù)合物，常用于染色或定位組織中的鈣質(zhì)沉積。其中酸性染色液適用于骨、軟骨等細(xì)胞外基質(zhì)鈣質(zhì)沉積染色；細(xì)胞內(nèi)鈣質(zhì)沉積量比較少，酸性染色液可能會(huì)使鈣質(zhì)溶解，導(dǎo)致染色效果差甚至假陰性，因此一般采用堿性染色液，同時(shí)堿性染色液可以增加染色時(shí)間，從而獲得比較滿意的染色效果。
染色效果：
圖1. 茜素紅S染色液(2%, pH4.2)用于小鼠尾椎骨石蠟切片的染色效果圖。如圖所示，鈣鹽沉積處顯橙紅色。注：實(shí)際染色效果會(huì)因樣品及實(shí)驗(yàn)條件的不同而存在差異，本圖僅供參考。
圖2. 茜素紅S染色液(0.2%, pH8.3)用于MC3T3-E1(小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞)細(xì)胞誘導(dǎo)分化后的染色效果圖。如圖所示，鈣鹽沉積處顯紫紅色。注：實(shí)際染色效果會(huì)因樣品及實(shí)驗(yàn)條件的不同而存在差異，本圖僅供參考。
圖3. 成骨細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)染色試劑盒(茜素紅S法)用于MC3T3-E1細(xì)胞誘導(dǎo)分化后的染色效果圖。如圖所示，經(jīng)本試劑盒染色后，MC3T3-E1細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)鈣鹽沉積處顯橙紅色。實(shí)際染色效果會(huì)因樣品及實(shí)驗(yàn)條件的不同而存在差異，本圖僅供參考。
成骨細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)染色試劑盒(茜素紅S法) (Alizarin Red S Staining Kit for Osteogenesis)，也稱成骨檢測試劑盒(Osteogenesis Assay Kit)，是一種基于茜素紅S螯合鈣離子(Ca2+)生成橙紅色復(fù)合物，以檢測成骨細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)的染色試劑盒。
人體和動(dòng)物的骨組織在生命過程中不斷地進(jìn)行著重建，骨重建過程包括骨的分解吸收與新骨的形成。破骨細(xì)胞(osteoclasts)負(fù)責(zé)骨分解與吸收，而成骨細(xì)胞(osteoblasts, OB)是骨形成的主要功能細(xì)胞，負(fù)責(zé)新骨形成。在成骨分化過程中，其基本的生物學(xué)特征是骨基質(zhì)合成、分泌、礦化及成熟。成骨細(xì)胞首先合成I型膠原(collagen-I, COL-I)、骨鈣素(osteocalcin, OC)、骨橋蛋白(osteopontin, OPN)等胞外基質(zhì)，并通過基質(zhì)小泡釋放鈣離子和堿性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)等酶類物質(zhì)，鈣離子在堿性磷酸酶作用下沉淀在膠原纖維絲上，完成基質(zhì)礦化過程，最終形成骨組織。I型膠原從增殖期開始表達(dá)，基質(zhì)合成期達(dá)巔峰；堿性磷酸酶是成骨細(xì)胞分化的早期標(biāo)志物，骨基質(zhì)合成期開始出現(xiàn)，礦化期達(dá)巔峰；骨鈣素是成骨細(xì)胞分化成熟的標(biāo)志，一般礦化早期開始表達(dá)，礦化結(jié)節(jié)成熟后達(dá)巔峰。礦化結(jié)節(jié)是成骨細(xì)胞分化成熟的標(biāo)志，同時(shí)也是成骨細(xì)胞行使成骨功能的主要形態(tài)學(xué)特征，觀察成骨細(xì)胞的礦化結(jié)節(jié)是研究成骨細(xì)胞分化的常用技術(shù)方法之一。
茜素紅S染色是一種常用的染色方法，廣泛用于成骨細(xì)胞分化、骨細(xì)胞或組織病理生理的研究。茜素紅S (Alizarin Red S, 簡稱ARS)，別名茜素磺酸鈉、茜素胭脂紅，CAS號為130-22-3，分子式為C14H7NaO7S，分子量為342.25。茜素紅S是一種蒽醌類衍生物，能和多種金屬離子螯合生成穩(wěn)定的橙紅色或深紅色的復(fù)合物，是一種良好的金屬指示劑，也可作為吸光度法測定金屬離子的顯色劑，還可作為酸堿指示劑，或用于極譜法測定金屬離子。在組織學(xué)和組織病理學(xué)中，由于茜素紅S可與碳酸鈣或磷酸鈣中的鈣鹽螯合形成橙紅色復(fù)合物，而常用于染色或定位組織中的鈣質(zhì)沉積。
本試劑盒中茜素紅S染色液的茜素紅S濃度經(jīng)過優(yōu)化，呈酸性，可以通過螯合成骨細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)中的鈣離子，以判斷成骨細(xì)胞的分化情況。針對不同樣品的特點(diǎn)，研發(fā)了三種茜素紅S染色液，具體請參考下表選擇合適的染色液。
| 產(chǎn)品名稱 | 茜素紅S染色液(2%, pH4.2) | 茜素紅S染色液(0.2%, pH8.3) | 成骨細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)染色液(茜素紅S法) |
| 產(chǎn)品編號 | C0138 | C0140 | C0148 |
| 產(chǎn)品屬性 | 酸性 | 堿性 | 酸性 |
| 產(chǎn)品濃度 | 2% | 0.2% | - |
| 染色效果 | 橙紅色 | 紫紅色-橙紅色 | 橙紅色 |
| 適用范圍 | 用于骨、軟骨等細(xì)胞外基質(zhì)鈣質(zhì)沉積的染色 | 細(xì)胞內(nèi)鈣質(zhì)沉積的染色 | 成骨細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)中的鈣質(zhì)染色 |
| 特點(diǎn) | 可快速染色；具有較好的染色效果 | 堿性，不易使鈣質(zhì)溶解；可通過增加染色時(shí)間增強(qiáng)染色效果 | 成骨細(xì)胞專用 |
本產(chǎn)品用于MC3T3-E1(小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞)誘導(dǎo)分化的染色效果參考圖1。
圖1. 成骨細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)染色試劑盒(茜素紅S法)用于MC3T3-E1細(xì)胞誘導(dǎo)分化后的染色效果圖。如圖所示，經(jīng)本試劑盒染色后，MC3T3-E1細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)鈣鹽沉積處顯橙紅色。實(shí)際染色效果會(huì)因樣品及實(shí)驗(yàn)條件的不同而存在差異，本圖僅供參考。
按照6孔板每孔使用1ml固定液和1ml茜素紅S染色液來計(jì)算，C0148S可以檢測50個(gè)樣品。
室溫避光保存，至少一年有效。保存條件：
注意事項(xiàng)：
首次使用固定液時(shí)，須特別注意加入40ml無水乙醇并混勻。由于固定液易揮發(fā)，使用完畢后請立即旋緊瓶蓋。
茜素紅S染色液的染色的最佳時(shí)間與樣品鈣離子的含量有關(guān)，一般情況下染色時(shí)間為30分鐘，可根據(jù)實(shí)際染色效果酌情增加或減少染色時(shí)間。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1.試劑盒的準(zhǔn)備：
首次使用時(shí)，請?jiān)诠潭ㄒ褐屑尤?0ml的無水乙醇，并充分混勻后備用。固定液加入無水乙醇配制完畢后，室溫避光保存，至少一年有效。
2.樣品處理。
a.細(xì)胞誘導(dǎo)分化之后，去除培養(yǎng)液，用PBS (C0221A)洗滌1次。
b.固定液固定20分鐘。
c.PBS洗滌3次。
3.茜素紅S染色液染色。
a.加入適量茜素紅S染色液，均勻覆蓋細(xì)胞即可，室溫染色30分鐘。注：請根據(jù)實(shí)際染色效果調(diào)整染色時(shí)間。
b.蒸餾水充分洗滌，隨后即可在顯微鏡下觀察和拍照。
