產(chǎn)品簡介：
過氧化物酶(peroxisome ，POD)是以過氧化氫為電子受體催化底物氧化的酶，主要存在于細(xì)胞的過氧化物酶體中，以鐵卟啉為輔基，可催化過氧化氫，氧化酚類和胺類化合物，具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用，該酶屬于細(xì)胞木質(zhì)素合成途徑中間的關(guān)鍵酶，研究該酶可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過程中木質(zhì)素沉積的代謝機(jī)理，為減少水果石細(xì)胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù)。
植物過氧化物酶(POD)檢測試劑盒(愈創(chuàng)木酚微板法)檢測原理是以愈創(chuàng)木酚(又稱 2-甲氧基酚)作為底物，在酶促反應(yīng)的最適條件下采用每隔一定時間測定產(chǎn)物生成量的方法，于酶標(biāo)儀470nm處測定吸光度，以吸光度變化所需酶量進(jìn)行計算，該試劑盒主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內(nèi)源性的過氧化物酶活性，尤其適用于測定水果中過氧化物酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
| 名稱 | 100T | Storage |
| 試劑(A): POD Lysis buffer | 2×250 ml | 4℃ |
| 試劑(B): POD Assay buffer | 10 ml | 4℃ 避光 |
| 試劑(C): POD氧化劑 | 1 ml | 4℃ |
| 試劑(D): POD終止液 | 1 ml | RT 避光 |
| 使用說明書 | 1 | 份 |
自備材料：
1、蒸餾水
2、研缽或勻漿器
3、離心管
4、低溫離心機(jī)
5、水浴鍋或恒溫箱
6、96孔板、酶標(biāo)儀
操作步驟(僅供參考)：
1、準(zhǔn)備樣品：
①植物樣品：取 2g 植物組織或水果中層果肉加入 4 ml 預(yù)冷的 POD Lysis buffer 研磨或勻漿，4℃ 10000g 離心 15 ~20 min，留取上清液，即為 POD粗提液，-20℃凍存，用于過氧化物酶的測定。
②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，-20℃凍存，用于過氧化物酶的測定。
③細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如有必要用 POD Lysis buffer 進(jìn)行適當(dāng)勻漿，4℃ 10000g 離心 15 ~20 min，留取上清液，即為 POD粗提液，-20℃凍存，用于過氧化物酶的測定。
④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的過氧化物酶，可以使用 POD Lysis buffer 進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/div>
2、配制 POD Assay buffer 工作液：取適量的 POD氧化劑和 POD Assay buffer，按 POD氧化劑：POD Assay buffer=1：14 混合，即為 POD Assay buffer 工作液，即配即用，不宜久置。
3、POD加樣：取 96 孔板，按照下表設(shè)置對照孔孔、測定孔，注意：對照孔、測定孔中為同一待測樣品，但對照孔中是提前加熱煮沸 5 min 的樣品。溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡，如果樣品中的 POD活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定，樣品的檢測最好能設(shè)置 2 平行孔，求平均值。
| 加入物(μl) | 對照孔 | 測定孔 |
| 待測樣品 | 5(提前煮沸） | 5 |
| POD Lysis buffer | 145 | 145 |
| POD Assay buffer 工作液 | 100 | 100 |
4、POD測定：立即以酶標(biāo)儀，以對照孔為對照，測定 470nm 處測定孔的吸光度(A測定0)。37℃準(zhǔn)確孵育 3 min 后，立即加入 5μl POD終止液終止反應(yīng)(備選方案)，以對照孔為對照，以酶標(biāo)儀測定 470n m 處測定孔的吸光度(A測定1)。注意：加入 POD終止液終止反應(yīng)不是必須步驟，可37℃準(zhǔn)確孵育3 min 后，以對照孔為對照，直接以酶標(biāo)儀測定470nm 處測定孔的吸光度(A測定1)。
計算：
POD活性單位的定義：在該實(shí)驗條件下，每1min 吸光度變化0.01所需酶量為一個活性單位。
組織樣本 POD( U) ={(A 測定 1- A 測定 0)×VT}/( W ×V S×0.01×t)
式中：A測定 1 =孵育 3 min后測定孔的吸光度值
A測定 0 =加入 POD Assay buffer 工作液后測定孔的吸光度值
W= 組織樣本的重量(g)
VT =提取酶液的總體積( ml)
VS =測定時所用酶液體積(ml)
t=反應(yīng)時間
液體樣本 POD( U) =( A測定 1-A測定 0)/(0.01×t)
式中：A測定1=孵育3min后測定孔的吸光度值
A測定0 =加入POD Assay buffer工作液后立即測定的測定孔吸光度值t=反應(yīng)時間
注意事項：
1、 待測樣品中不能含有酶抑制劑，同時需避免反復(fù)凍融。
2、 POD酶液提取時，注意低溫操作，防止酶活性。
3、 以煮沸的酶液為對照時，酶要充分失活。
4、 POD氧化劑和 POD終止液具有一定腐蝕性，請小心操作。
5、 POD氧化劑易揮發(fā)，請密閉保存，否則檢測效率下降。
6、 如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計測定，每次檢測指標(biāo)不宜過多，否則操作時間不一，有可能導(dǎo)致樣本間的差異。
7、 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
有效期：6 個月有效。常溫運(yùn)輸，4℃保存。
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