正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
土壤硝酸還原酶（Solid-Nitrate Reductase，S-NR）試劑盒測定意義
S-NR催化土壤中硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，是土壤硝態(tài)氮還原的關鍵酶。研究 S-NR 的活性對合理施肥，降低氮素的損失具有重要意義。
測定原理
S-NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，NO3ˉ+NADH+H＋→ NO2ˉ+NAD＋+H2O；產(chǎn)生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下，與對–氨基苯磺酸及α- 萘胺定量生成紅色偶氮化合物；生成的紅色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰，可用分光光度法測定。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一：液體 12mL×1 瓶，-20℃保存。
試劑二：液體 4mL×1 瓶，-20℃保存。
試劑三：液體 9mL×1 瓶，4℃保存（如出現(xiàn)結晶析出，60度水浴溶解后使用）。
試劑四：液體 9mL×1 瓶，4℃保存。
試劑五：標準品儲備液 1mL，-20℃保存。
0.1μmol/mL 標準液的配制：用時將試劑五稀釋100倍，即取0.1ml加蒸餾水定容至 10ml。
測定步驟
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至540nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定
| 1mL 帶蓋離心管 | 試劑名稱 | |||
| 測定管 | 對照管 | 標準管 | 空白管 | |
| 風干土樣（g） | 0.06 | 0.06 |
|
|
| 0.1μmol/mL標準液（μL） |
|
| 60 |
|
| 蒸餾水（μL） |
| 300 |
| 360 |
| 試劑一（μL） | 225 |
| 225 |
|
| 試劑二（μL） | 75 |
| 75 |
|
| 混勻后，蓋蓋后 37℃水浴 60min，8000g 25℃離心 10min，取上清液 | ||||
| 上清液（μL） | 130 | 130 | 130 | 130 |
| 試劑三（μL） | 85 | 85 | 85 | 85 |
| 試劑四（μL） | 85 | 85 | 85 | 85 |
混勻，顯色 20min 后，4000g，25℃離心 10min，取 200uL 上清液至微量石英比色皿或 96
孔板中，540nm下讀取各管吸光值。標準管和空白管只需測一次。每個測定管設一個對照管。S-NR 活性計算：
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol NO2ˉ的量為一個S-NR活力單位。
S-NR（μmol /d/g）=C 標準×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）×V 反總÷W÷T =12×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）
C 標準管：標準管濃度，0.1μmol/mL；V 反總：反應體系總體積，0.3mL；T：反應時間，1h=1/24d； W：樣本質量，0.06g。
