注意:正式測(cè)定前務(wù)必取2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
土壤過(guò)氧化氫酶(Solid-Catalase,S-CAT)試劑盒產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑一:液體×1 瓶,4℃保存;臨用前加入29.7mL 蒸餾水充分溶解后待用;用不完的試劑4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入1mL 蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑三:液體×1 瓶,4℃保存。
產(chǎn)品說(shuō)明:
S-CAT是土壤微生物代謝的重要酶類,在H2O2 清除系統(tǒng)中具有重要作用。
H2O2 在240nm下有特征吸收峰,通過(guò)測(cè)定與土壤反應(yīng)后溶液在此波長(zhǎng)下吸光度的變化,即可反應(yīng)S-CAT 活性的高低。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板(UV板)和蒸餾水
操作步驟:
一、樣品處理:
新鮮土樣自然風(fēng)干或37 度烘箱風(fēng)干,過(guò)30~50 目篩。
二、測(cè)定步驟:
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至240nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 加樣表
試劑名稱 | 測(cè)定管 | 無(wú)基質(zhì)管 | 無(wú)土管 |
風(fēng)干土樣(g) | 0.03 | 0.03 |
|
試劑一(μL) | 260 |
| 260 |
雙蒸水(μL) |
| 260 |
|
25℃振蕩培養(yǎng) 20min | |||
試劑二(μL) | 10 | 10 | 10 |
混勻8000g,25℃離心5min,取全部上清 | |||
試劑三(μL) | 30 | 30 | 30 |
混勻,取200uL 至微量石英比色皿或96 孔板中,240nm 處記錄各管吸光值A。
注意:每個(gè)測(cè)定管要設(shè)一個(gè)無(wú)基質(zhì)管,無(wú)土管只要做一管。
A、用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
單位的定義:每天每g 風(fēng)干土樣催化1μmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。
計(jì)算公式:S-CAT(μmol/d/g)=[(A 無(wú)土管-A 測(cè)定管+A 無(wú)基質(zhì)管)×V 反總÷(ε×d)×106]÷W÷T=16.5×(A 無(wú)土管-A 測(cè)定管+A 無(wú)基質(zhì)管)
V 反總:反應(yīng)體系總體積,3×10-4 L;ε:過(guò)氧化氫摩爾消光系數(shù),4.36×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm; T:反應(yīng)時(shí)間,20 min=1/72d; W:樣本質(zhì)量,0.03g。
B、用96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
單位的定義:每天每g 風(fēng)干土樣催化1μmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。
計(jì)算公式:S-CAT(μmol/d/g)=[(A 無(wú)土管-A 測(cè)定管+A 無(wú)基質(zhì)管)×V 反總÷(ε×d)×106]÷W÷T=33×(A 無(wú)土管-A 測(cè)定管+A 無(wú)基質(zhì)管)
V 反總:反應(yīng)體系總體積,3×10-4 L;ε:過(guò)氧化氫摩爾消光系數(shù),4.36×104 L / mol /cm;d:96 孔板光徑,0.5cm; T:反應(yīng)時(shí)間,20 min=1/72d; W:樣品質(zhì)量,0.03g。