土壤脲酶（UE)測(cè)試盒微量法正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
UE 能夠水解尿素，產(chǎn)生氨和碳酸。UE 活性與有機(jī)物質(zhì)含量、全氮和速效氮含量呈正相關(guān)， 反應(yīng)了氮素狀況。
測(cè)定原理：
利用靛酚藍(lán)比色法測(cè)定脲酶水解尿素產(chǎn)生的 NH3-N。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1 瓶，臨用前加入 9mL 蒸餾水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的試劑 4℃ 保存；
試劑二：液體 19mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三 A 液：液體×1 支，4℃保存；試劑三 B 液：液體×1 瓶，4℃保存；臨用前將 A 液倒入 B 液中混合，待用；用不完的試劑 4℃保存一周；
試劑四：液體 2mL×1 瓶，4℃保存；
樣本的前處理：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 578nm，蒸餾水調(diào)零。
2、酶促反應(yīng)
| 試劑名稱 | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
| 樣本（μL） | 20 | 20 |
| 試劑一（μL） | 90 |
|
| 蒸餾水（μL） |
| 90 |
| 試劑二（μL） | 190 | 190 |
混勻，放入 37℃水浴 1h 后，10000g 25℃離心 10min，取上清液。
2、將上清液稀釋 10 倍（取 0.1mL 上清液，加入 0.9mL 蒸餾水）。
3、測(cè)氨量（在微量石英比色皿或 96 孔板中加入下列試劑）
|
| 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
| 稀釋后的上清液（μL） | 80 | 80 |
| 試劑三（μL） | 15 | 15 |
| 試劑四（μL） | 15 | 15 |
充分混勻，室溫放置 20min
| 蒸餾水（μL） | 90 | 90 |
混勻，于 578nm 處，蒸餾水調(diào)零，讀吸光值 A，計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
UE 活力計(jì)算
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y = 0.0915x +0.0373；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL），y 為吸光值
A。
1、血清（漿）UE 活力的計(jì)算:
單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘產(chǎn)生 1μg NH3-N 定義為一個(gè)酶活力單位。
UE 活力（μg/min/mL）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反總÷V 樣÷T=27.32×(ΔA -0.0373)
單位的定義：每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1μg NH3-N 定義為一個(gè)酶活力單位。
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 1μg NH3-N 活力的計(jì)算:
（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘產(chǎn)生 1μg NH3-N 定義為一個(gè)酶活力單位。
UE 活力（μg/min/mg prot）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反總÷(V 樣×Cpr)÷T =27.32×(ΔA
-0.0373) ÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每 g 組織每分鐘產(chǎn)生 1μg NH3-N 定義為一個(gè)酶活力單位。
UE 活力（μg/min/ g 鮮重）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T =27.32×(ΔA
-0.0373) ÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生 1μg NH3-N 定義為一個(gè)酶活力單位。
UE 活力（μg/min/104 cell）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=0.0546×ΔA
10：稀釋倍數(shù)；T：反應(yīng)時(shí)間，60min； V 反總：反應(yīng)體系總體積：0.3mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.02mL；V 樣總：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；
W：樣本質(zhì)量， g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。
b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y = 0.04575x +0.0373；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL），y 為吸光值
A。
1、血清（漿）UE 活力的計(jì)算:
單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘產(chǎn)生 1μg NH3-N 定義為一個(gè)酶活力單位。
UE 活力（μg/min/mL）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反總÷V 樣÷T=54.64×(ΔA -0.0373)
單位的定義：每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1μg NH3-N 定義為一個(gè)酶活力單位。
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 1μg NH3-N 活力的計(jì)算:
（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘產(chǎn)生 1μg NH3-N 定義為一個(gè)酶活力單位。
UE 活力（μg/min/mg prot）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反總÷(V 樣×Cpr)÷T =54.64×(ΔA
-0.0373) ÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每 g 組織每分鐘產(chǎn)生 1μg NH3-N 定義為一個(gè)酶活力單位。
UE 活力（ μg/min/g 鮮重） ＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T
=54.64×(ΔA -0.0373) ÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生 1μg NH3-N 定義為一個(gè)酶活力單位。
UE 活力（ μg/min/104 cell ） ＝ (ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)
÷T=0.1092×ΔA
10：稀釋倍數(shù)；T：反應(yīng)時(shí)間，60min； V 反總：反應(yīng)體系總體積：0.3mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.02mL；V 樣總：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；
W：樣本質(zhì)量， g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。
