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土壤過(guò)氧化物酶(S-POD)測(cè)試盒

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 正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

S-POD 主要來(lái)源于土壤微生物,能夠氧化土壤有機(jī)物質(zhì)產(chǎn)生過(guò)氧化物,在腐殖質(zhì)的形成過(guò)

程中具有重要作用。

測(cè)定原理:

S-POD催化有機(jī)物質(zhì)氧化成醌,后者在430nm有特征光吸收。

自備用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、乙醚50mL(不允許快遞)、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:粉劑×1 瓶,臨用前加入 10mL 蒸餾水,用不完的試劑仍4℃保存;

試劑二:液體 2mL×1 瓶,4℃保存;

試劑三:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:乙醚 50mL×1 瓶,4℃保存;(自備)

測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至430nm,蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表

試劑名稱

測(cè)定管

風(fēng)干土樣(g

0.02

試劑一(μL

100

試劑二(μL

20

振蕩混勻,30℃恒溫培養(yǎng) 1 h

試劑三(μL

50

試劑四(μL

430

振蕩數(shù)次,25℃室溫靜置 30min,取 200μL 上層液于 430nm 處測(cè)定吸光值 A。

S-POD 活力計(jì)算

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y= 8.97x -0.003;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值 A。

單位的定義:每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 紫色沒(méi)食子素定義為一個(gè)酶活力單位。

S-POD 活力(mg/d/g 土樣)=(A+0.003) ÷8.97×V 反總÷W÷T=80×(A+0.003)

T:反應(yīng)時(shí)間,1h=1/24d; V 反總:反應(yīng)體系總體積 0.6mLW:樣本質(zhì)量,0.02g

b.96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y=4.485x -0.003;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值 A

單位的定義:每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 紫色沒(méi)食子素定義為一個(gè)酶活力單位。

S-POD 活力(mg/d/g 土樣)=(A+0.003) ÷4.485×V 反總÷W÷T=160×(A+0.003)T:反應(yīng)時(shí)間,1h=1/24dV 反總:反應(yīng)體系總體積 0.6mL;W:樣本質(zhì)量,0.02g

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