注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
土壤錳過氧化物酶 (Soil manganese peroxidase,S-Mnp)試劑盒測定意義
錳過氧化物酶(EC1.11.1.13)是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶,主要存在于擔(dān)子菌中,屬于木質(zhì)素降解酶系,能有效的降解木質(zhì)素及廢水和土壤中比較難降解的氯化物,疊氮化合物、DTT,多環(huán)芳烴等。
測定原理
錳過氧化物酶在 Mn2+存在的條件下,將愈創(chuàng)木酚氧化為四鄰甲氧基連酚,在465nm 有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、震蕩儀、甲苯。
試劑組成和配制
試劑一:液體 30mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體 5mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑四:液體 5mL×1 瓶,4℃保存。
測定操作
| 對照管 | 測定管 |
土樣(g) | 0.1 | 0.1 |
甲苯(μL) | 50 | 50 |
25℃,靜置 15min | ||
試劑一(μL) | 700 | 600 |
試劑二(μL) |
| 100 |
試劑三(μL) | 200 | 200 |
試劑四(μL) | 100 | 100 |
充分混勻,于 37℃震蕩反應(yīng) 10min,于 10000rpm,4℃離心 10min,取上清于 1mL 玻璃比色皿,測定 465nm 處吸光值,記為 A 對照管和A 測定管,△A=A 測定管- A 對照管 |
酶活計算公式
酶活性定義:每克土壤每分鐘氧化 1nmol 愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個酶活力單位。
S-MnP 活性(nmol/min/g)=△A÷ε÷d×V 反總÷W÷T= 8.3×△A÷W
ε:愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù):12100L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V 反總:反應(yīng)總體積,1mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,10min