植物總糖和還原糖檢測(cè)試劑盒(DNS  微板法)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

植物體內(nèi)的碳素營(yíng)養(yǎng)狀況以及農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)形狀，常以糖含量作為重要指標(biāo)，單糖和某些寡糖(如麥芽糖)含有游離的醛基或酮基，具有還原性，屬于還原糖；多糖和蔗糖等屬于非還原糖，可以利用非還原糖能被酸水解為單糖的特性通過測(cè)定水解后的單糖含量對(duì)總糖進(jìn)行測(cè)定。

 植物總糖和還原糖檢測(cè)試劑盒(DNS 微板法)檢測(cè)原理是還原糖在堿性加熱條件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量與棕紅色產(chǎn)物的顏色深淺程度呈一定比例關(guān)系，在 540nm 處用酶標(biāo)儀測(cè)定棕紅色物質(zhì)的吸光度，該吸光度值與還原糖含量呈線性關(guān)系，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中的還原糖和總糖的含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1、蒸餾水

2、50ml 離心管、1ml 離心管

3、離心機(jī)

4、水浴鍋或恒溫箱

5、酶標(biāo)儀、96 孔板

6、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液

操作步驟(僅供參考)：

1、還原糖的提�。�

①稱取植物樣品 0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約 3ml 勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用 12ml蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。

②50℃水浴  30min，并不時(shí)攪拌，以便還原糖徹底浸出。

③將沉淀和浸出液轉(zhuǎn)移至 50ml 離心管，4000g 離心 5min。

④留取上清液，向沉淀中加入 20ml 蒸餾水，混勻，再次 4000g 離心 5min。

⑤留取上清液，將 2 次獲得的上清液合并，用蒸餾水定容至 100ml(提取液)，混勻，作為還原糖待測(cè)液。

2、總糖的水解和提�。�

①稱取植物樣品 0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約 3ml 勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用 12m蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。

②向容器中加入 10ml 6M 鹽酸溶液，攪拌均勻，煮沸 30min，并不時(shí)攪拌。。

③取 2 滴滴加于載玻片上，滴加 1 滴顯色液(約 50ul)，檢查水解是否完全，如已經(jīng)水解完全，則不顯示藍(lán)色。

④水解完畢后，冷卻至室溫，加入 6M 氫氧化鈉溶液，使溶液 pH 至 7.4，用蒸餾水定容至 100ml，混勻，4000g 離心 5min 或過濾。

⑤取上清或?yàn)V液 10ml，用蒸餾水定容至 100ml，成稀釋 10 倍的總糖水解液(提取液)，取 50ul 總糖水解液，測(cè)定其還原糖的含量。

3、稀釋葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)：取干凈離心管或試管，按下表操作，依次獲得系列濃度的  Glu  標(biāo)準(zhǔn)。

4、加樣：取 1ml 離心管，按照下表設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡，小心混勻；如果樣品中的糖濃度過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置 2~3 平行孔，求平均值。

5、還原糖測(cè)定：混勻，依次抽取 300ul 轉(zhuǎn)移至相應(yīng) 96 孔板中，以空白孔調(diào)零，測(cè)定 540nm處標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)定孔的吸光度。

計(jì)算：以系列 Glu 標(biāo)準(zhǔn)(1~5 號(hào))，即標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)提取液的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的葡萄糖濃度。

還原糖的百分含量：

100g 樣品中還原糖含量(g)=(c×V_T)/(m×1000)×100=(c×V_T)/(m×10)總糖的百分含量：

100g 樣品中總糖含量(g)=(c×N×V_T)/(m×1000)×100×0.9

=(c×N×V_T)/(m×10)×0.9

式中：c=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查的糖量(mg/ml) V_T=提取液的總體積(ml)=100 m=植物樣品的質(zhì)量(g)

N=總糖水解液的稀釋倍數(shù)=10

注意事項(xiàng)：

1、  上述低溫試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降。

2、  待測(cè)樣品如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)置于 2~8℃保存，3 天內(nèi)穩(wěn)定。

3、   如果樣品還原糖濃度過高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

4、 總糖計(jì)算公式在測(cè)定干擾雜質(zhì)很少、還原糖含量相對(duì)總糖含量很少時(shí)使用，×0.9 是為了從測(cè)定出的總糖水解成單糖中，扣除水解時(shí)所消耗的水量。

5、 6M 鹽酸配制：一般市售的濃鹽酸為 11.6~12M，用蒸餾水或去離子水與濃鹽酸 1：1混合即配制成 6M，鹽酸溶于水會(huì)放熱，應(yīng)小心操作，避免傷人。

6、 6M 氫氧化鈉配制：氫氧化鈉 24g 溶解于蒸餾水或去離子水，補(bǔ)至 100ml，氫氧化鈉溶于水會(huì)放熱，應(yīng)小心操作，避免傷人。

有效期：12 個(gè)月有效。