正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
S-α-GC 能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團(tuán)之間的糖苷鍵生成葡萄糖,是纖維素分解酶
系中重要組成成分之一,在土壤微生物的糖類代謝方面具有重要生理功能。
測(cè)定原理:
S-α-GC 能夠催化對(duì)-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成對(duì)-硝基苯酚,后者在 400nm 有特征光
吸收。
自備用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、
研缽、冰、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存;(自備)
試劑二:粉劑×1 瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入 13mL 蒸餾水,充分溶解備用,用不完的
試劑仍-20℃保存;
試劑三:液體 20mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:液體 15mL×1 瓶,4℃保存;
測(cè)定步驟:
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 400nm,蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表
試劑名稱 測(cè)定管 對(duì)照管
風(fēng)干土樣(g) 0.02 0.02
試劑一(μL) 10 10
振蕩混勻,使土樣全部濕潤(rùn),室溫放置 15min
試劑二(μL) 130
試劑三(μL) 160 160
混勻, 37℃水浴 1h 后,95℃水浴 5min(蓋緊,防止水分散失),流水冷卻
試劑二(μL) 130
充分混勻,10000g 25℃離心 10min,取上清液(在 EP 管或 96 孔板中加入下列試劑)
上清液(μL) 70 70
試劑四(μL) 130 130
充分混勻,室溫靜置 2min 后, 400nm 處測(cè)定吸光值 A,計(jì)算 ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每
個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
S-α-GC 活力計(jì)算:
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y = 0.0032x -0.0027;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/L),y 為吸光值。
單位的定義:每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1 μmol 對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
S-α-GC 活力(μmol/d/g 土樣)= (ΔA+0.0027) ÷0.0032×V 反總÷W÷T =112.5×(ΔA+0.0027)
T:反應(yīng)時(shí)間,1h=1/24d; V 反總:反應(yīng)體系總體積:3×10-4
L;W:樣本質(zhì)量,0.02g。
b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y = 0.0016x -0.0027;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/L),y 為吸光值。
單位的定義:每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1 μmol 對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
S-α-GC 活力(μmol/d /g 土樣)= (ΔA+0.0027) ÷0.0016×V 反總÷W÷T =225×(ΔA+0.0027)
T:反應(yīng)時(shí)間,1h=1/24d; V 反總:反應(yīng)體系總體積:3×10-4
L;W:樣本質(zhì)量,0.02g。
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