注 意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導(dǎo)的作用，但積累過多時會對細(xì)胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞作用，導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。
測定原理：
超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2－，NO2－在對氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成紅色的偶氮化合物，在530nm處有特征吸收峰，根據(jù)ΔA值可以計(jì)算樣品中O2－含量，反應(yīng)式為NH2OH + 2O2－ ＋H＋ → NO2－ ＋ H2O2 ＋ H2O。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、氯仿和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體25mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體20mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體20mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：氯仿，自備。
超氧陰離子提取：
1. 植物、動物組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心20min，取上清置于冰上待測。。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心20min，取上清置于冰上待測。
3. 血清或培養(yǎng)液：直接測定。
測定操作表：
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| 空白管 | 測定管 |
| 樣本（μL） |
| 500 |
| 提取液（μL） | 500 |
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| 試劑一（μL） | 400 | 400 |
| 混勻，37℃水浴20min | ||
| 試劑二（μL） | 300 | 300 |
| 試劑三（μL） | 300 | 300 |
| 混勻，37℃水浴20min | ||
| 試劑四（μL） | 500 | 500 |
| 混勻，8000g，25℃，離心5min，小心吸取上層水相1mL， 1mL玻璃比色皿，蒸餾水調(diào)零，測定A530。ΔA=A測定-A空白，空白管只要做一管。 | ||
