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尿酸(Uric Acid, UA)含量測定試劑盒微量法

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 注意:正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

尿酸(Uric Acid, UA)含量測定試劑盒微量法測定意義:
UA 是鳥類和爬行類動物的主要代謝產(chǎn)物,正常人體尿液中產(chǎn)物主要為尿素,含少量尿酸。
此外,UA 還是重要的抗氧化劑,能清除超氧化物,羥自由基等。體內(nèi) UA 生成量和排泄量
不平衡會導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。例如,血中 UA 升高會引起痛風(fēng)、腎功能損害和動脈硬化,
相反 UA 降低會引起惡性貧血,在臨床診斷上具有重要的意義。
測定原理:
尿酸酶能催化 UA 生成尿囊素,CO2及 H2O2,H2O2 氧化亞鐵氰化鉀中的 Fe2+ 生成 Fe3+ ,
Fe3+進(jìn)一步與酚和 4-氨基安替比林縮合生成紅色醌類化合物,在 505nm 下有特征吸收峰,
測定反應(yīng)體系 505nm 的吸收值,可計算尿酸的含量。
自備實驗用品及儀器:
恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
緩沖液:液體 20mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:
A:用于標(biāo)準(zhǔn)管和測定管,粉劑 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 13mL 緩沖液溶解。
B:用于空白管,粉劑 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 7 mL 緩沖液溶解。
試劑二:粉劑 1 管,4℃避光保存,使用前加 2mL 蒸餾水溶解,60℃加熱溶解。
測定操作表:
1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 505nm。
2、 操作表
標(biāo)準(zhǔn)管 空白管 測定管
試劑一(μL) A, 60 B, 60 A, 60
H2O(μL) 180 240 180
試劑二(μL) 60
樣品(μL) 60
混勻,37℃水浴 30min,取 200µL 于微量石英比色皿/96 孔板中,空白管調(diào)零,分別測定標(biāo)
準(zhǔn)管和測定管在 505nm 處的吸光值,記為 A 標(biāo)和 A 測。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。
UV 含量計算公式:
尿酸(μmol/L)=(A 測÷A 標(biāo))×C 標(biāo)
A 測:測定管吸光值;A 標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)管吸光值;C 標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)品濃度 500μmol/L
注意事項:
1. 血清樣本請在 24 小時內(nèi)測定,或者 4℃密封避光保存不超過 72 小時。
2. 吸光值大于 0.8 可用蒸餾水稀釋樣本,并在計算公式中算入稀釋倍數(shù)。
3. 最低檢出限為 10μmol/L。
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