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銅藍蛋白(Ceruloplasmin)測定試劑盒

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   意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

銅藍蛋白是血漿的含銅蛋白,有運輸銅的功能,同時具有氧化酶的活性,是細胞外液重要的抗氧化劑。

 

測定原理

銅藍蛋白催化3,3,5,5-四甲基聯(lián)苯胺生成藍色產物,在645nm處有特征吸收峰,依此可得銅藍蛋白活性。

 

自備實驗用品及儀器

天平、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿和蒸餾水。

 

試劑組成和配制

試劑一:液體15mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體10mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:液體20mL×1瓶,4℃避光保存。(使用前37℃預熱)

 

測定操作表

1、 血清(漿)等液體樣本:直接檢測。

2、 動植物組織樣本:稱取約0.1g組織,加入1mL蒸餾水,進行冰浴勻漿。10000g ,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

 

空白管

測定管

樣品µL

100

100

試劑一µL

300

300

試劑二µL

200

 

混勻,37℃預熱5min

試劑三µL

400

400

混勻,37℃反應30min

試劑二µL

 

200

混勻,25℃放置5min1 mL玻璃比色皿,空白管調零,測定OD645

 

計算公式

1、 按體積計算

單位定義:37℃條件下,每分鐘每毫升樣品與底物作用吸光值升高0.01為一個酶活單位。

Cp活力(U/mL×V反總÷V樣÷T=33.33×OD645

2、 按鮮重計算

單位定義:37℃條件下,每分鐘每克樣品與底物作用吸光值升高0.01為一個酶活單位。

 

Cp活力(U/g鮮重)=×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T=33.33×OD645÷W

3、 按蛋白濃度計算

單位定義:37℃條件下,每分鐘每毫克蛋白樣品與底物作用吸光值升高0.01為一個酶活單位。

Cp活力(U/mg prot=×V反總÷(Cpr×V樣)÷T=33.33×OD645÷Cpr

V樣:0.1 mL;V總:1 mLT:反應時間,30min;V樣總:加入提取液體積,1mL Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣質量,g

 

注意事項

試劑二和試劑三有一定的毒性和刺激性,請操作時做好防護措施。

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