葡萄糖檢測(cè)試劑盒(Folin-Wu比色法)

一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

葡萄糖(Glucose, Dextrose,Glu)又稱玉米葡糖，簡(jiǎn)稱葡糖，化學(xué)式C;H1zO6，分子里為180.16，是自然界分布最廣、最重要的一種單糖，屬于多羥基醛。用酶學(xué)方法測(cè)定葡萄糖是生化檢測(cè)中的常用方法，最常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法，上述酶學(xué)法特點(diǎn)是：1、靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度均高；2、使用溫和的反應(yīng)條件；3、操作簡(jiǎn)便；4、適用于自動(dòng)分析儀，測(cè)定葡萄糖亦可通過(guò)鄰甲苯胺法、苯胺法、聯(lián)苯胺法等實(shí)現(xiàn)。

雅吉生物葡萄糖檢測(cè)試劑盒(Folin-Wu比色法)檢測(cè)原理是葡萄糖在加熱的堿性環(huán)境中銅離子還原成氧化亞銅沉淀，后者使磷鉬酸還原成鉬藍(lán)，使溶液呈藍(lán)色，顏色深淺與葡萄糖含量成正比，其最高吸收峰為420nm，利用分光光度計(jì)測(cè)定樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值，通過(guò)公式可以計(jì)算出樣品的葡萄糖含量，可用于人或動(dòng)物的血清、血漿、腦脊液、細(xì)胞、組織細(xì)胞培養(yǎng)基等樣本中的葡萄糖含量定量測(cè)定。

該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

三、自備材料：

1、蒸餾水、PBS、生理鹽水

2、離心管

3、水浴鍋

4、分光光度計(jì)

四、操作步驟(僅供參考)：

1、樣本處理：

①血清、血漿、腦脊液樣本：從待測(cè)樣本中分離出的血清或血漿不應(yīng)有溶血，一般需要去除。蛋白質(zhì)(即為無(wú)蛋白血濾液)后再經(jīng)檢測(cè)。取抗凝血1ml，加入7ml蒸餾水和1ml蛋白酸化液，混勻，緩慢加入1ml蛋白沉淀液，邊加邊搖勻，至出現(xiàn)暗紅色蛋白質(zhì)沉淀,靜置10min ,3000g離心5min，取上清液即為無(wú)蛋白血濾液，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>

②組織樣本：準(zhǔn)確稱取適量組織樣本，按質(zhì)量(g)：生理鹽水或PBS(ml)=1:9的比例，加入生理鹽水或PBS，冰浴條件下手動(dòng)或機(jī)械勻漿，2500~3000g離心10min，取上清待用。

③細(xì)胞樣本：

a. 取適量的細(xì)胞(一般推薦>10以上)，1000g 離心10min，棄上清，留取沉淀。

b. 用PBS或生理鹽水清洗1~2次，1000g離心10min，棄上清，留取沉淀。

c. 加入200~300ul的PBS或生理鹽水勻漿，冰浴條件下超聲破碎細(xì)胞，功率300W，每次3~5s，間隔30s，重復(fù)3~5次;亦可手動(dòng)勻漿，制備好的勻漿液不可離心;亦可用1~2% Triton X-100冰浴30~60min，制備好的裂解液不可離心。

2、制備Glu標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(0.55mmol/L )：取10ul Glu標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存液(55mmol/L)，補(bǔ)加蒸餾水或者無(wú)菌水990ul，充分混勻即可。根據(jù)需用量，臨用前按比例配置，不宜久存。

3、Glu加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡，如果樣品中的Glu濃度過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

充分混勻，置于沸水浴煮沸8min，取出，在冷水中冷卻，注意不能搖動(dòng)，靜置10min,分別加入3.75ml蒸餾水。

4、Glu測(cè)定∶取不大于2ml上述溶液，以空白管調(diào)零，用分光光度計(jì)在420nm處讀取標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管的吸光度。

五、結(jié)果計(jì)算∶

葡萄糖含量(mmol/L)=(測(cè)定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度)×0.55×10

=(測(cè)定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度)×5.5

其中10為去蛋白樣品的稀釋倍數(shù)

六、注意事項(xiàng):

1、待測(cè)樣本如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)置于2~8℃保存，3天內(nèi)穩(wěn)定。

2、上述低溫試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降。

3、Glu標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液臨用前按比例配置，不宜久存。

4、如樣品吸光度值偏大，則需再次稀釋后重新檢測(cè)。

5、樣品中含有蛋白等干擾物質(zhì)時(shí)，須用去蛋白的方法處理后再行檢測(cè)。

6、煮沸時(shí)不能動(dòng)搖，避免液體濺出。

七、 有效期∶6個(gè)月有效。4℃保存，4℃運(yùn)輸。