抗體修飾熱啟動酶 PCR Mix
Abstart PCR Mix
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人、動物的醫(yī)療或診斷程序，不能使用
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組成
組分 B110007-0001 B110007-0005
Abstart PCR Mix（2X）
( Mg2+終濃度 2 mM )
1 ml 5 ml
保存方法
-15°C 到 -25°C 保存，有效期見包裝。
產(chǎn)品介紹
Abstart PCR Mix 為預先混合的 Abstart Taq DNA 聚合酶、
反應緩沖液、氯化鎂和 dNTP 的濃縮溶液。DNA 模版和引
物簡單添加即可開始 PCR 反應。常規(guī) PCR 擴增的一致性和
效率得以優(yōu)化。
操作流程
1. PCR 反應體系的設置：
1) 溶解并混勻 PCR 反應所需的各種溶液。并放置于冰浴
上或冰盒內(nèi)。建議反應 PCR 液體分裝使用，避免反復
凍融。
2) 參考下表設置的反應,建議 PCR 反應體系的配置在冰
浴或在冰盒上進行：
試劑 50 μl 反應體系
Abstart PCR Mix（2X） 25 μl
Template DNA X μl*
Primer F（20 μM） 1 μl
Primer R（20 μM） 1 μl
雙蒸水或 Milli-Q 水 Up to 50 μl
總體積 50 μl
*對于不同類型的模板在 50 µl 反應體積中推薦用量如下：
哺乳動物基因組 DNA：0.1-1 µg；
大腸桿菌基因組 DNA：10-100 ng；
質(zhì)粒 DNA：0.1-10 ng。
過多的模板 DNA 容易導致非特異性的 PCR 產(chǎn)物。
3) 用移液器輕輕吹打混勻或輕微 Vortex 混勻，室溫離心
數(shù)秒，使液體積聚于管底。
4) 各設置好的 PCR 反應管置于 PCR 儀上，開始 PCR 反
應。
2. PCR 反應參數(shù)的設置以擴增 1 Kb 目的片段為例：
步驟 溫度 時間 循環(huán)數(shù)
預變性 95°C 3 min -
變性 95°C 30 s
退火 (Tm-5)°C 30 s 35 個循環(huán)
延伸 72°C 1 min
最終延伸 72°C 10 min -
保存 4°C forever -
1) PCR 反應的設置需根據(jù)模板、引物、PCR 產(chǎn)物的長度
和 GC 含量等條件的不同設定不同的 PCR 反應條件包
括溫度、時間和循環(huán)數(shù)等。
2) 延伸的時間設置需根據(jù) PCR 產(chǎn)物的長度進行設置，通
常每 kb 產(chǎn)物的延伸時間為 1 分鐘。例如 PCR 產(chǎn)物的
長度為 1 kb，則延伸時間可以設置為 1 分鐘，PCR 產(chǎn)
物的長度為 2 kb，則延伸時間可以設置為 2 分鐘，以
此類推。
3) 對于初次進行的 PCR，為盡量確�？梢詳U增出預期的
PCR 產(chǎn)物，可以把循環(huán)數(shù)設置為 35。對于需進行半定
量或定量的 PCR 反應循環(huán)數(shù)一定要進行適當優(yōu)化，使
PCR 反應達到平臺期。
#B110007 保存溫度：-20°C
包裝規(guī)格：1 ml/5 ml
Sangon Biotech
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