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人外周血淋巴細(xì)胞分離液

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

別名 人淋巴細(xì)胞分離液
英文名稱 Lymphocyte Separation Medium (Human)
儲(chǔ)存條件 RT,避光,有效期2年
單位 200ml/瓶 20瓶/箱
規(guī)格 200ml 200ml*20
外周血中單個(gè)核細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等細(xì)胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同,紅細(xì)胞和粒細(xì)胞密度較大,為1.090 g/ml 左右,而淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度為1.075~1.090 g/ml,血小板為1.030~1.035 g/ml。為此,將葡聚糖(右旋糖酐)和泛影酸葡甲胺按一定比例混合,調(diào)整比重、pH 值和滲透壓,經(jīng)過澄清及過濾除菌后制成一種密度在1.077g/ml 并且近于等滲的溶液(分層液),經(jīng)過密度梯度離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將各種血細(xì)胞加以分離。

 

本品為帶有乳光或微乳光的注射水溶液,主要組成成份是葡聚糖(右旋糖酐)與泛影酸葡甲胺。適用于從人抗凝血液中分離單個(gè)核細(xì)胞(主要為淋巴細(xì)胞),無(wú)菌條件下所分離的細(xì)胞可用于免疫學(xué)檢測(cè)。

分離方法說(shuō)明及圖例:

取新鮮抗凝血1ml,與生理鹽水1:1 混勻后,小心加于2ml細(xì)胞分離液之液面上;以400g(約1500轉(zhuǎn)/分,半徑15cm水平轉(zhuǎn)子)離心20分鐘,此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分四層。第一層:為血漿層。第二層:為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層。第三層:為透明分離液層。第四層:為紅細(xì)胞層。收集第二層細(xì)胞放入含生理鹽水4-5ml的試管中,充分混勻后,以400g(約1500轉(zhuǎn)/分)離心20分鐘。沉淀經(jīng)2次洗滌后即得所需淋巴細(xì)胞。

注: 提取率約為80%。

注意事項(xiàng):

A.本分離液要求血液為新鮮抗凝血,避免冷凍和冷藏;在收集血液和分離過程中,應(yīng)注意無(wú)菌操作,避免微生物污染。

B.本實(shí)驗(yàn)要求,在正常大氣壓下,分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為20℃±2℃。分離液在低溫時(shí)呈較高密度,在高溫時(shí)呈較低密度。細(xì)胞分離液從冰箱取出后,不可立即使用,操作前可將樣本和分離液置于20℃水浴中復(fù)溫20分鐘以保證分離溫度。

C.由于各品牌離心機(jī)的性能不同,國(guó)內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響分離效果,用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間,摸索最佳的分離條件(具體分離條件各實(shí)驗(yàn)室自定)。

D.最好使用無(wú)靜電反應(yīng)的離心管,推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。

E.最優(yōu)抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。應(yīng)注意在血液稀釋過程中應(yīng)去除抗凝劑體積。

產(chǎn)品性能指標(biāo):

密度 1.077±0.001g/ml

pH                              7.0-7.5

滲透壓                         280-340mOsmol/kg

內(nèi)毒素                         ≤0.5EU/ml

無(wú)菌                           直接接種培養(yǎng)14天后培養(yǎng)基澄清

澄明度及不溶性顆粒物           每50ml 溶液中含10μm 以上的不溶性微粒20 粒以下,

含25μm 以上的不溶性微粒5 粒以下

貯藏及保存期限:

本分離液是敏光型的,應(yīng)在18℃-25℃避光保存,有效期兩年。啟封后置4℃保存,若保證無(wú)微生物污染, 4℃可長(zhǎng)期保存。保存溫度較低(10℃以下)時(shí)本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

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