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Y染色體上95%是男性特異區(qū)域，里面含和男性有關(guān)的基因。SRY基因（Sex-determining Region on Y Chromosome，SRY），雄性的性別決定基因，指Y染色體上具體決定生物雄性性別的基因片段。人的SRY基因位于Yp11.3，只含有一個(gè)外顯子，沒有內(nèi)含子，轉(zhuǎn)錄單位長約1.1kb，編碼一個(gè)204氨基酸的蛋白質(zhì)。本產(chǎn)品就是以探針法熒光定量 PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測人Y染色體性別決定區(qū)（SRY）的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2.引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高。
3.提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4.特異性高，引物是根據(jù)人Y染色體性別決定區(qū)（SRY）DNA 高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他 DNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。
5.既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時(shí)線性范圍至少為 5個(gè)數(shù)量級。
6.本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應(yīng)。
本產(chǎn)品只能用于科研。
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2，1。
2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同。
3.在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用
5.換槍頭，在 4 號管中加入 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E4 拷貝/μL 標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用
6.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。二、樣品 DNA 的制備
7.如果有 N 個(gè)樣品待提取，最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的是 PC（樣品制備陽
性對照）和 NC（樣品制備陰性對照）。可以取陽性對照的 1000 倍稀釋液10μL 再加上一定量的水，使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致，以此作為 PC。另外用水作為 NC。
8.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù) DNA 提取試劑盒兼容。
三、Probe qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè)PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個(gè)用于 PCR 陽性對照（用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數(shù)據(jù)處理
12.如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。
13.如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該小于或等于 37。對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 37 則為陽性。如果在 37-40 之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct
值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小于 40，則為陽性。
