產(chǎn)品概述 product description
葉綠體是植物細胞所特有的能量轉(zhuǎn)換細胞器，光合作用就是在葉綠體中進行的, 由于具有這一重要功能，所以葉綠體一直是細胞生物學、遺傳學和分子生物學的重要研究對象。葉綠體是植物細胞中較大的一種細胞器。跨膜蛋白承擔各種生物功能，在生物的各種發(fā)展過程中扮演重要角色。膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個難以逾越的挑戰(zhàn)。 葉綠體膜蛋白提取試劑盒用簡便快速的方法可以從各種植物樣本中提取葉綠體膜蛋白，提取過程簡單方便，可在一小時內(nèi)提取得到高質(zhì)量的葉綠體膜蛋白。該試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高質(zhì)量的蛋白提供了保證。 本試劑盒含有的獨特配方能夠有效溶解膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。 本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。 本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白
保存溫度
2-8℃
注意事項
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！
有效期
一年
檢測方法
WB,IP等
適用樣本
植物
產(chǎn)品特點
1.使用方便。
2.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
3.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
4.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性。
2.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
3.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
4.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性。
產(chǎn)品應用
WB,IP等
儀器準備
1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
試劑準備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
2.蛋白定量試劑盒
耗材準備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項
使用注意事項：
旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
操作時必須按照下面步驟里的溫度條件，否則嚴重影響膜蛋白的回收率。
提取液B在使用前須一直置于2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時會導致不容易分層。
膜蛋白電泳時loading buffer應該避免煮沸。
膜蛋白電泳時可以提高loading buffer的SDS含量。
旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
操作時必須按照下面步驟里的溫度條件，否則嚴重影響膜蛋白的回收率。
提取液B在使用前須一直置于2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時會導致不容易分層。
膜蛋白電泳時loading buffer應該避免煮沸。
膜蛋白電泳時可以提高loading buffer的SDS含量。
使用方法
1. 提取液制備：
每500 μl冷的蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取500 mg-1 g新鮮植物葉片樣本，用純水洗凈擦干后去除葉梗和粗脈，用手術剪刀或鋒利的刀片剪切碎，切成0.5 mm*0.5 mm細塊。
3. 加入500 μl提取液A，充分混勻。
4. 將懸液置振蕩器上室溫振蕩12-72小時。
5. 在1000×g條件下離心5-10分鐘，棄上清，收集沉淀。
6. 在沉淀中加入2 ml提取液B用組織攪碎機/勻漿機/Dounce勻漿器充分勻漿。
7. 將勻漿用100 um細胞篩過濾。
8. 將濾液500×g力離心3分鐘。將上清移入另一干凈離心管。
9. 將上清3000×g力離心10分鐘。棄上清，收集沉淀。
10. 在沉淀中加入500 μl蛋白提取液C，充分混勻。 在2-8℃條件下振蕩1小時。
11. 將提取液在4℃，12000×g條件下離心5分鐘，取上清。
12. 在37℃水浴10分鐘。
13. 在37℃ ，500-1000×g離心3分鐘。
14. 此時溶液分為兩層，小心移除上層，保留下層溶液，大約30-50μl。
15. 用50-150 μl冷的膜蛋白溶解液溶解下層溶液，即得葉綠體膜蛋白。
16. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛘{(diào)整相應的濃度后直接用于下游實驗。
每500 μl冷的蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取500 mg-1 g新鮮植物葉片樣本，用純水洗凈擦干后去除葉梗和粗脈，用手術剪刀或鋒利的刀片剪切碎，切成0.5 mm*0.5 mm細塊。
3. 加入500 μl提取液A，充分混勻。
4. 將懸液置振蕩器上室溫振蕩12-72小時。
5. 在1000×g條件下離心5-10分鐘，棄上清，收集沉淀。
6. 在沉淀中加入2 ml提取液B用組織攪碎機/勻漿機/Dounce勻漿器充分勻漿。
7. 將勻漿用100 um細胞篩過濾。
8. 將濾液500×g力離心3分鐘。將上清移入另一干凈離心管。
9. 將上清3000×g力離心10分鐘。棄上清，收集沉淀。
10. 在沉淀中加入500 μl蛋白提取液C，充分混勻。 在2-8℃條件下振蕩1小時。
11. 將提取液在4℃，12000×g條件下離心5分鐘，取上清。
12. 在37℃水浴10分鐘。
13. 在37℃ ，500-1000×g離心3分鐘。
14. 此時溶液分為兩層，小心移除上層，保留下層溶液，大約30-50μl。
15. 用50-150 μl冷的膜蛋白溶解液溶解下層溶液，即得葉綠體膜蛋白。
16. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛘{(diào)整相應的濃度后直接用于下游實驗。
常見問題分析
1.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時可能沒有裂解完全，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑AB的處理時間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。
4.膜蛋白電泳沒有條帶？
膜蛋白樣品通常濃度較低，電泳前一定要進行蛋白定量，以保證電泳是蛋白上樣量足夠。
膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超聲處理一下，再進行蛋白定量。
蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸，采用50℃保溫30分鐘。
蛋白Loading buffer中SDS終濃度含量可以提高至3%-10%。
有些樣品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上樣緩沖液中，一般可以跑出清晰的蛋白條帶。
電泳時最后采用低電壓低電流電泳。
處理部分組織樣本時可能沒有裂解完全，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑AB的處理時間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。
4.膜蛋白電泳沒有條帶？
膜蛋白樣品通常濃度較低，電泳前一定要進行蛋白定量，以保證電泳是蛋白上樣量足夠。
膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超聲處理一下，再進行蛋白定量。
蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸，采用50℃保溫30分鐘。
蛋白Loading buffer中SDS終濃度含量可以提高至3%-10%。
有些樣品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上樣緩沖液中，一般可以跑出清晰的蛋白條帶。
電泳時最后采用低電壓低電流電泳。
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