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Bst 3.0 DNA/RNA聚合酶

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與Bst 2.0 DNA 聚合酶和Bst DNA 聚合酶大片段相比,Bst 3.0 DNA/RNA 聚合酶具有更佳的等溫擴增活性和更強的逆轉(zhuǎn)錄活性。無論以DNA還是RNA為模板,該酶都具有5’-3’的DNA聚合酶活性和強烈的鏈置換活性,但該酶5’-3’和3’-5’的外切酶活性缺失。 在以RNA為模板的LAMP實驗中,可實現(xiàn)單酶系統(tǒng)反應(yīng)。Bst 3.0 DNA/RNA 聚合酶在60-65度之間具有很好的反轉(zhuǎn)錄活性,可有效解決具有二級復(fù)雜結(jié)構(gòu)的RNA模板的反轉(zhuǎn)錄,而Bst 2.0 DNA 聚合酶和Bst DNA 聚合酶大片段無此活性。

Bst DNA聚合酶性能比較

  擴增速度 逆轉(zhuǎn)錄活性 雜質(zhì)耐受性 dUTP識別能力 應(yīng)用
Bst大片段 * * * N/A 常規(guī)鏈置換反應(yīng)
Bst 2.0 ** ** ** **** DNA LAMP SDA反應(yīng)
Bst 3.0 **** *** **** ** LAMP和RT-LAMP反應(yīng)
Bst 4.0 **** ***** **** ** RT-LAMP最佳用酶

組分

組分名稱 數(shù)量
Bst 3.0 DNA/RNA Polymerase (8 U/μl) 200 μl/1 ml×2
10×Isothermo Buffer(Mg2+ free) 1 ml×2/20 ml
100mM Mg2+ 1 ml×2/20 ml

主要特征

  • 同時具有較強的延伸能力和逆轉(zhuǎn)錄活性
  • 耐熱性能極強,對于復(fù)雜模板的擴增活性強
  • 強烈的鏈置換活性,可應(yīng)用于LAMP檢測

單位定義

一個活力單位即在65°C條件下,30分鐘內(nèi)催化10 nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量。

應(yīng)用

  • 恒溫PCR擴增
  • DNA LAMP和RT-LAMP
  • 鏈置換基因合成
  • 在60-65℃之間具有反轉(zhuǎn)錄活性,可用于單管RT-PCR

儲存

-20℃可保存3年。
LAMP引物設(shè)計與實驗指南
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實例

LAMP實驗

3173 LAMP實驗

A:以pEasy質(zhì)粒為模板,應(yīng)用Bst 3.0 DNA聚合酶和六條引物進行LAMP實驗(65℃,30min),1-6分別為:模板0、5ng、2.5ng、1.5ng、1ng、0.5ng,M:DNA Marker2000;B:以140ng human RNA為模板,應(yīng)用Bst 3.0 DNA聚合酶和六條引物進行LAMP實驗(65℃,30min),1-3:140ng human RNA為模板,4:不加模板,M:M:DNA Marker2000;
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