與Bst 2.0 DNA 聚合酶和Bst DNA 聚合酶大片段相比,Bst 3.0 DNA/RNA 聚合酶具有更佳的等溫擴增活性和更強的逆轉(zhuǎn)錄活性。無論以DNA還是RNA為模板,該酶都具有5’-3’的DNA聚合酶活性和強烈的鏈置換活性,但該酶5’-3’和3’-5’的外切酶活性缺失。 在以RNA為模板的LAMP實驗中,可實現(xiàn)單酶系統(tǒng)反應(yīng)。Bst 3.0 DNA/RNA 聚合酶在60-65度之間具有很好的反轉(zhuǎn)錄活性,可有效解決具有二級復(fù)雜結(jié)構(gòu)的RNA模板的反轉(zhuǎn)錄,而Bst 2.0 DNA 聚合酶和Bst DNA 聚合酶大片段無此活性。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
Bst DNA聚合酶性能比較 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
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組分 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
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主要特征 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
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單位定義 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
一個活力單位即在65°C條件下,30分鐘內(nèi)催化10 nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
應(yīng)用 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
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儲存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
-20℃可保存3年。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
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實例 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
LAMP實驗
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A:以pEasy質(zhì)粒為模板,應(yīng)用Bst 3.0 DNA聚合酶和六條引物進行LAMP實驗(65℃,30min),1-6分別為:模板0、5ng、2.5ng、1.5ng、1ng、0.5ng,M:DNA Marker2000;B:以140ng human RNA為模板,應(yīng)用Bst 3.0 DNA聚合酶和六條引物進行LAMP實驗(65℃,30min),1-3:140ng human RNA為模板,4:不加模板,M:M:DNA Marker2000; |
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