pRL-TK(報告基因質(zhì)粒)是碧云天自行研發(fā)的用于在哺乳動物細胞中進行海腎螢光素酶(Renilla luciferase)報告基因檢測的質(zhì)粒,主要用于在其多克隆位點插入感興趣的5’-UTR、啟動子、增強子等調(diào)控元件研究該調(diào)控序列的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性,或用作螢火蟲螢光素酶(firefly luciferase)報告基因檢測時的內(nèi)參,從而消除因為質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效率不同而帶來的誤差。
pRL-TK質(zhì)粒帶有的HSV TK promoter (單純皰疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶啟動子)相對于SV40和CMV增強子/啟動子較弱,更適用于共轉(zhuǎn)系統(tǒng)中的內(nèi)參報告基因。
pRL-TK質(zhì)粒攜帶renilla luciferase基因,編碼分子量為36kD的海腎螢光素酶,翻譯后無需修飾,常用于報告基因檢測。
本質(zhì)粒為氨芐抗性。
pRL-TK質(zhì)粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide | Position |
HSV-TK promoter | 7-759 |
Multiple cloning site | 760-795 |
Chimeric intron | 862-998 |
T7 RNA polymerase transcription(-17 to +2) | 1042-1060 |
T7 RNA polymerase transcription initiation site | 1059 |
Rluc reporter gene | 1070-2005 |
SV40 late polyadenylation signal | 2047-2248 |
β-lactamase (Ampr) coding region | 2395-3255 |
pRL-TK質(zhì)粒的圖譜如下:
pRL-TK中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut pRL-TK)包括:
AatII | Acc65I | AgeI | AscI | Asp718 | BlpI | BseRI | BsgI |
BsiWI | BsmBI | BspMII | BstEII | BstXI | Bsu36I | DraIII | Eco47III |
Eco72I | EspI | FseI | KpnI | NaeI | NdeI | NgoMI | NruI |
NsiI | PaeR7I | PflMI | PmeI | PmlI | RsrII | SacI | SfiI |
SnaBI | SphI | SplI |
pRL-TK中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut pRL-TK once)包括:
BglII | A`GATC,T | 2 | Bsp120I | G`GGCC,C | 791 |
MscI | TGG|CCA | 129 | ApaI | G,GGCC`C | 795 |
SapI | GCTCTTC 8/11 | 138 | BspMI | ACCTGC 10/14 | 853 |
BssHII | G`CGCG,C | 242 | NheI | G`CTAG,C | 1061 |
PspAI | C`CCGG,G | 283 | XcmI | CCANNNN,N`NNNNTGG | 1720 |
XmaI | C`CCGG,G | 283 | BsrGI | T`GTAC,A | 1769 |
SmaI | CCC|GGG | 285 | XbaI | T`CTAG,A | 2008 |
KasI | G`GCGC,C | 290 | NotI | GC`GGCC,GC | 2015 |
NarI | GG`CG,CC | 291 | EagI | C`GGCC,G | 2015 |
EheI | GGC|GCC | 292 | XmaIII | C`GGCC,G | 2015 |
BbeI | G,GCGC`C | 294 | HpaI | GTT|AAC | 2158 |
SacII | CC,GC`GG | 300 | MunI | C`AATT,G | 2167 |
PpuMI | RG`GWC,CY | 320 | ClaI | AT`CG,AT | 2253 |
AvrII | C`CTAG,G | 323 | BsaBI | GATNN|NNATC | 2259 |
NcoI | C`CATG,G | 331 | BamHI | G`GATC,C | 2260 |
Bst1107I | GTA|TAC | 344 | SspI | AAT|ATT | 2378 |
XcaI | GTA|TAC | 344 | Bsp1286I | G,DGCH`C | 2600 |
PvuII | CAG|CTG | 532 | PvuI | CG,AT`CG | 2814 |
MluI | A`CGCG,T | 714 | EcoNI | CCTNN`N,NNAGG | 2822 |
HindIII | A`AGCT,T | 761 | FspI | TGC|GCA | 2960 |
EcoRV | GAT|ATC | 775 | Cfr10I | R`CCGG,Y | 3098 |
SalI | G`TCGA,C | 779 | AhdI | GACNN,N`NNGTC | 3183 |
SpeI | A`CTAG,T | 785 | HgiEII | ACCNNNNNNGGT -1/13 | 3482 |
pRL-TK質(zhì)粒中推薦使用的測序引物序列如下:
T7 Primer(1042-1060): TAATACGACTCACTATAGG
pRL-TK的全序列信息:pRL-TK全序列.txt。
包裝清單:
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
D2760-1μg | pRL-TK(報告基因質(zhì)粒) | 1μg |
D2760-100μg | pRL-TK(報告基因質(zhì)粒) | 100μg |
— | 說明書 | 1份 |
保存條件:
-20℃保存。
注意事項:
本質(zhì)粒未經(jīng)碧云天書面許可不得用于任何商業(yè)用途,也不得移交給訂貨人所在實驗室外的任何個人或單位。
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