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植物根系活力檢測試劑盒(TTC比色法)

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 產(chǎn)品簡介:

植物根系是活躍的吸收器官和合成器官,根的生長情況和代謝水平即根系活力將直接影響植物地上部分的生長和營養(yǎng)狀況以及最終產(chǎn)量,是植物生長的重要生理指標(biāo)之一。TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)是一種氧化還原物質(zhì),是標(biāo)準(zhǔn)氧化電位為80mV 的氧化還原色素,溶解于水為無色,但還原后即生成紅色而不溶于水的三苯基甲腙(TTF),TTF比較穩(wěn)定,不會被空氣中的氧自動氧化,所以TTC 常被用作酶試驗的氫受體。 植物根系活力檢測試劑盒(TTC 比色法),又稱作植物根系脫氫酶活性檢測試劑盒,其檢測原理是當(dāng)測定植物根系活力時,以TTC 為底物,保溫1~4 小時,根系中脫氫酶能夠還原TTC 并生成不溶于水的紅色TTF,再用有機(jī)溶劑(乙酸乙酯或丙酮等)將其從根中提取出來,用分光光度計或酶標(biāo)儀檢測485nm 處吸光度,進(jìn)而計算出TTC 的還原量,以該還原量表示脫氫酶活性,并作為植物根系活力的指標(biāo)。該試劑盒主要用于定量測定植物的根系活力或脫氫酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。 

產(chǎn)品組成:

 

名稱規(guī)格

50T

存儲

試劑(A): TTC

1g

RT 避 光

試劑(B): TTC Assay buffer

250ml

RT

試劑(C): TTC 終止液

100ml

RT

試劑(D): Na2S2O4 粉末

0.1g

RT

使用說明書

一份

  自備材料:

1、蒸餾水、乙酸乙酯
2、離心管或容量瓶、濾紙
3、恒溫箱或水浴鍋、研缽或勻漿器
4、分光光度計或酶標(biāo)儀、比色杯或 96 孔板 
操作步驟(僅供參考):
1、配制 TTC 溶液(0.4%):稱取 0.4g TTC 完全溶解于 100ml 蒸餾水即成,配制成溶液后應(yīng) 4℃避光保存,若變紅應(yīng)棄用。
2、配制 TTC Assay buffer 工作液:將 TTC 溶液(0.4%)與 TTC Assay buffer 等比例混合即成,建議現(xiàn)用現(xiàn)配,4℃避光保存,若變紅應(yīng)棄用。
3、配制TTF 標(biāo)準(zhǔn)工作液:取0.25mlTTC 溶液(0.4%)置于10ml 離心管或容量瓶,加入少許Na2S2O4粉末(一般2mg 左右),混勻,產(chǎn)生紅色的不溶于水的紅色顆粒物TTF,加10ml 乙酸乙酯,充分混合溶解顆粒,靜置分層(下層0.25ml 為無色水層,不可用),上層紅色溶液中TTF 濃度為100μg/ml。
按下表分別移取上層紅色溶液0.25、0.5、1、1.5、2ml 置于離心管或容量瓶中, 用乙酸乙酯補(bǔ)加至 10ml,即獲得 TTF 系列標(biāo)準(zhǔn)管。 

加入物(ml)

0

1

2

3

4

5

TTF 標(biāo)準(zhǔn)工作液

0

0.25

0.5

1

1.5

2

乙酸乙酯

10

9.75

9.5

9

8.5

8

相當(dāng)于 TTF 含量(μg)

0

25

50

100

150

200

4、準(zhǔn)備樣品:取0.2~0.5g 植物須根系,洗凈,用濾紙吸干,完全浸沒于TTCAssay buffer工作液中,37℃避光孵育1~3h,加入2mlTTC 終止液終止反應(yīng)。同時做一空白對照實驗,即根系先完全浸沒于2mlTTC 終止液以殺死根樣,再加入10mlTTCAssay buffer工作液,37℃避光孵育1~3h。
5、提。分別將上述實驗組和空白對照組的根系取出,濾紙吸干水分,放入研缽或勻漿器中,加入3~4ml 乙酸乙酯,充分研磨或勻漿,以提取出TTF。把紅色提取液(TTF)轉(zhuǎn)移至離心管,并用少量乙酸乙酯把殘渣洗滌2~3 次,再將洗滌液一并轉(zhuǎn)移至離心管,最后補(bǔ)加乙酸乙酯至10ml,搖勻。
6、測定:比色杯光徑1.0cm,系列標(biāo)準(zhǔn)管以“0”號管調(diào)零,測定1~5 號管485nm 的吸光度值;樣品管以空白對照組樣品提取液做參比,調(diào)零,以分光光度計或酶標(biāo)儀測定實驗組樣品提取液在485nm 的吸光度值。 
計算:以系列標(biāo)準(zhǔn)溶液TTF 含量(25、50、100、150、200ug)為橫坐標(biāo),以對應(yīng)吸光度為縱坐標(biāo),繪制TTF 標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)回歸方程計算待測樣品的TTF 含量或TTC 還原量(μg),即為根系活力或脫氫酶活性。
根系(脫氫酶)活力[mg/(g.h)]=m/(1000×W×t)
式中:m=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的樣品提取液TTF 含量(μg)= TTC 還原量(μg) W=植物須根系的重量(g)t=孵育時間(h) 
注意事項:
1、 配制好的 TTC 溶液(0.4%)和 TTC Assay buffer 工作液應(yīng)避光保存,若變紅應(yīng)棄用。
2、 根系種類不同,取樣量可有不同。
3、 根系應(yīng)吸干水分但不能擠壓傷及細(xì)胞,才能測定準(zhǔn)確。
4、 提取用的研缽或勻漿器、試管、比色皿均應(yīng)保持干燥,沒有水分。
5、由于本實驗采用有機(jī)溶劑(乙酸乙酯或丙酮)提取TTF,因此不能用一次性塑料比色皿或者酶標(biāo)條進(jìn)行檢測。建議用石英比色皿或玻璃比色皿檢測,檢測完成后用乙醇清洗并用水沖洗干燥即可。
6、 如果沒有分光光度計,也可以使用酶標(biāo)儀測定,但應(yīng)注意酶標(biāo)板每孔檢測體積。
7、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 
附錄:參考標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍:測定空白對照,通過分光光度計測定其吸光度多在0.03-0.07 之間。 測定TTF 標(biāo)準(zhǔn)在25、50、100、150、200、400μg 時吸光度,據(jù)此 作出其標(biāo)準(zhǔn)曲線如下:
 
注意:由于檢測儀器和操作手法等條件的不同,參考值范圍會有波動,該值僅供參考, 對于要求精確計算植物根系含量的,可以采用標(biāo)準(zhǔn)曲線多點重復(fù)測定;根據(jù)  測定經(jīng)驗顯示,TTF 含量在 5μg 以下, 400μg 以上,標(biāo)準(zhǔn)曲線會有偏差。
有效期:12 個月有效。

 

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